砷诱导人外周血淋巴细胞凋亡及硒拮抗作用的研究

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目的:体外培养人外周血淋巴细胞,探讨不同浓度的亚砷酸钠(NaAsO2)对淋巴细胞的生物学效应及作用机制,并观察亚硒酸钠(Na2SeO3)对砷毒性的拮抗作用。方法:用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)观察不同浓度砷和砷硒联合对淋巴细胞生长的影响,并用倒置显微镜、透射电镜、荧光染色、细胞免疫组化法、琼脂糖凝胶电泳等检测方法,分别对不同浓度的加药组与对照组的淋巴细胞形态学改变,细胞的存活率及bcl-2蛋白表达进行观察和测定:并用流式细胞仪测定淋巴细胞凋亡率和细胞周期分布。结果:(1)NaAsO2和Na2SeO3在一定浓度范围内以浓度依赖方式抑制淋巴细胞生长,其IC50分别为8.63μmol/L和5.12μmol/L。淋巴细胞的生存率随着NaAsO2浓度的增加而降低;浓度为0.5μmol/L的硒对各浓度的砷有一定的拮抗作用;(2)用砷组在荧光显微镜和透射电镜下均可见明显的细胞凋亡形态特征,电镜下观察,淋巴细胞表面突起较少或脱失,部分细胞核染色质聚集、边移、线粒体结构模糊不清:(3)1.0μmol/L NaAsO2作用淋巴细胞48小时后,琼脂糖凝胶电泳可见到DNA“梯形”条带;(4)流式细胞仪分析可见0.1、1.0、5.0μmol/L用砷组有亚“G1”峰
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