黄瓜是世界性的重要蔬菜作物之一,株型是黄瓜重要的农艺性状。卷须是影响黄瓜株型的重要组织器官。本实验室已克隆调控黄瓜卷须发育的关键基因TEN,该基因属于TCP家族中Class II的CYC/TB1亚类。TCP(TEOSINTE BRANCHED1/CYCLOIDEA/PCF1,2)转录因子是植物特有的一类转录因子,主要参与植物细胞分化和生长,在植物的生长发育、形态建成以及对外界环境的适应过程中起着重要的调控作用。目前针对这一亚类基因的直接下游基因和转录结合元件鲜有报道。本研究主要是通过体外SAAB试验寻找卷须身份基因TEN的结合元件,并结合转录组数据和体内的Ch IP-Seq数据来寻找TEN的下游候选基因,即参与黄瓜卷须发育的基因,初步解析卷须发育的分子机制。主要结果如下:1.利用公司制备的TEN抗体,对黄瓜根、茎、叶、雌花、雄花、果实、卷须的粗蛋白进行Western Blot检测,结果表明TEN蛋白在黄瓜卷须中特异表达。2.检测1~3 cm嫩卷须、伸直卷须和缠绕3~5圈的卷须中TEN蛋白含量,结果显示TEN总蛋白含量从卷须幼嫩时逐渐升高,到伸直时期含量最高,到缠绕时期含量又开始降低;将黄瓜卷须中总蛋白、细胞质、细胞器和细胞核蛋白进行分离,来确定TEN蛋白在卷须细胞中分布情况,结果发现蛋白大多集中在细胞质,核中很少。3.正常卷须与变态卷须的转录组数据比较发现:在变态卷须中上调的基因有1271个,与植物侧枝发育相关的基因显著富集;下调的基因有433个,与植物向触性运动相关的基因显著富集。4.利用卷须材料得到Ch IP-DNA进行测序,然后运用生物信息学手段进行数据处理,结果表明TEN结合的核心元件很可能是AAGAAG/A或C/TTTCTT。5.诱导条件经优化后,0.1 m M IPTG,22℃,180 rpm,8 h条件下能得到较多可溶性的GST-TEN融合蛋白,分子量大小约为71 k Da,与预测的融合蛋白大小相符合。6.体外的SAAB试验结果表明TEN的结合元件为GGNCCC和ACAC。