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猪丹毒和猪链球菌病分别是由猪丹毒丝菌(E.rhusiopathiae)和多种致病性猪链球菌(Streptococcus suis,SS)引起一种急性、热性人畜共患传染病,不仅会造成养猪业的严重经济损失,而且还时刻威胁着人类的健康安全。血清型1a型E.rhusiopathiae和2型猪链球菌(SS2)是我国猪群中分离率最高、致病力最强的菌株。在当前全面开展减抗、限抗并逐步朝向禁抗的大趋势下,疫苗接种无疑是防控猪丹毒和猪链球菌病的最有效措施。灭活苗由于研制周期短、易于保存、使用安全、更利于制备多联苗等优点得以在临床上普遍应用。而多联苗的使用则可以实现一针防多病的目的。目前尚未有商品化猪丹毒和猪链球菌病二联苗报道。本研究系以前期通过致病性、抗原性和稳定性试验,筛选出的1a型E.rhusiopathiae和SS2作为制苗菌株,研制猪丹毒和猪链球菌病二联灭活苗并利用小鼠进行免疫效果评价,旨为进一步实施该二联灭活苗的临床应用奠定基础,为有效防控猪丹毒和猪链球菌病提供技术储备。本研究利用筛选出的制苗菌株1a型E.rhusiopathiae(代号AEr31)和SS2(代号HF2)进行以下试验:(1)以甲醛为灭活剂、ISA 201 VG矿物油佐剂,采用两种方式制备二联灭活苗[A:(V-AEr31+V-HF2)+ISA 201VG、B:(V-AEr31+ISA 201VG)+(V-HF2+ISA201VG)],经性状检验、无菌检验和安全性检验判定疫苗合格与否。(2)将两种方式制备的二联灭活苗分别免疫小鼠,应用间接ELISA方法检测血清中Ig G抗体水平以及相关细胞因子水平(IL-4、IL-10、IFN-γ、TNF-β、MCP-1);血清杀菌试验检测功能性抗体水平;MTT方法测定脾淋巴细胞增殖指数;流式细胞术测定CD4~+与CD8~+T淋巴细胞亚群百分比;腹腔攻毒试验测定免疫保护率,组织荷菌数测定攻毒菌株在小鼠体内的定植情况,并制作肺、肝、脾、肾脏的病理组织切片,观察病理变化。结果显示:(1)两种方式制备的二联灭活苗为水包油包水型(W/O/W),均符合粘度检验、稳定性检验、无菌检验和安全检验的合格要求。(2)在整个免疫阶段,灭菌生理盐水对照C组各项检测指标始终无明显变化,免疫A组和B组均可产生较好的体液免疫和细胞免疫,两组之间无显著差异(P>0.05)。其中,A、B组诱导小鼠血清Ig G抗体水平均持续升高且显著高于C组(P<0.05),二免后14d,A、B、C组Ig G抗体效价分别为1:25600、1:25600、1:400;A、B组诱导小鼠血清功能性抗体水平均持续升高且显著高于与C组(P<0.05),二免后14d均具有较强的杀菌效果;A、B组相关细胞因子水平(IL-4、IL-10、INF-γ、TNF-β、MCP-1)、脾淋巴细胞增殖指数以及CD4~+与CD8~+T细胞亚群百分比均持续上升且显著高于C组(P<0.05);攻毒后,A、B组对E.rhusiopathiae、SS和E.rhusiopathiae-SS混合菌液的保护率均为100%;A、B组均可有效预防E.rhusiopathiae和SS对小鼠的侵染,二免后14d,各脏器(肺、肝、肾、脾)细菌定植量达到最低,且显著低于C组(P<0.05);与C组相比,A、B组小鼠各器官病变均较为轻微且两组之间无显著差异。结果表明:(1)本研究以AEr31和HF2为制苗菌株、甲醛为灭活剂、ISA 201 VG矿物油佐剂,采用灭活菌液与佐剂两种不同混合方式成功制备了性状稳定、无菌检验、安全检验合格的猪丹毒丝菌-猪链球菌二联灭活苗,分别命名为(V-AEr31+V-HF2)+ISA201VG和(V-AEr31+ISA 201VG)+(V-HF2+ISA 201VG)。(2)以昆明小鼠为实验动物模型,对(V-AEr31+V-HF2)+ISA 201VG和(V-AEr31+ISA 201VG)+(V-HF2+ISA 201VG)进行免疫效果评价,两者之间无显著差异,免疫小鼠后均能产生良好的体液免疫和细胞免疫,可100%抵抗E.rhusiopathiae、SS强毒株的攻击,为猪丹毒丝菌-猪链球菌二联灭活苗商品化奠定基础,给猪丹毒以及猪链球菌病的防控提供新思路和技术储备。