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目的:观察转录辅助因子4(PC4)调控非同源末端连接修复在非小细胞肺癌放疗中的作用,初步探讨其产生作用的发生机制。方法:实验选取了4组不同的非小细胞肺癌细胞系进行研究,采用四质粒共转染方法转染293FT细胞,从而获得慢病毒颗粒,经过嘌呤霉素筛选,成功的构建A549、PC-9干扰PC4表达、恢复PC4表达以及空载对照的稳定株细胞(sh PC4、sh PC4+PC4、Mock)。设置0-8Gy(分别为0Gy、2Gy、4Gy、6Gy、8Gy)梯度剂量照射细胞。采用平板克隆实验,检测细胞在接受不同辐射剂量照射后,克隆形成能力的变化情况;采用流式细胞术,检测PC4不同表达状态下,细胞接受辐射之后出现凋亡率变化的情况;Western Blot及PCR法观察PC4对非同源末端连接(NHEJ)相关蛋白XLF、XRCC4、DNA LigaseⅣ表达的影响;利用免疫荧光技术,观察XLF与DNA双链断裂(DSB)共定位能力的变化及对其修复的影响;利用免疫共沉淀法(IP),检测PC4与XLF相互作用及变化情况;通过染色质免疫共沉淀法(CHIP),检测PC4与XLF启动子结合能力的变化。结果:相较于支气管上皮细胞Beas-2B而言,PC4在A549、PC-9、H1975、H460四组非小细胞肺癌细胞中高表达。干扰PC4的表达后,A549和PC-9细胞的克隆形成率降低,辐射敏感性提高,恢复PC4的表达后,细胞的克隆形成率也随之升高,细胞对于辐射的敏感性下降。进一步的研究发现,干扰了PC4的表达后,辐射引起的细胞凋亡增加,此外,抑制了PC4表达后,XLF表达下降,且PC4与XLF的相互作用减少,而XRCC4以及DNA LigaseⅣ的表达未见明显变化。免疫荧光结果显示:细胞接受照射后,sh PC4组的XLF表达降低,同时DNA双链断裂修复减少,恢复PC4表达后,XLF表达以及DSB修复都得到了恢复。IP及CHIP结果显示:PC4在转录水平调控XLF的表达,敲低PC4表达后,PC4与XLF的相互作用减少。结论:下调PC4可在转录水平抑制XLF的表达,通过减少非同源末端连接修复增加了辐射引起的凋亡,从而增强了非小细胞肺癌细胞的辐射敏感性,PC4可能通过参与NHEJ影响细胞对辐射的敏感性。