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目的:研究白细胞介素-35(IL-35)过表达慢病毒载体转染小鼠脂肪间充质干细胞的可行性,并探讨其影响小鼠免疫功能的机制。方法:1.采用I型胶原酶消化法获取小鼠脂肪来源间充质干细胞;体外以过表达IL-35慢病毒颗粒转染小鼠脂肪间充质干细胞,倒置荧光显微镜观察转染细胞的绿荧光表达评估转染情况;流式细胞术(FCM)检测其转染效率;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测不同感染条件下细胞上清中IL-35的表达情况,从而获得IL-35基因修饰的间充质干细胞。2.经C57BL/6小鼠尾静脉注射IL-35基因修饰间充质干细胞(IL-35-MSCs组),并与注射间充质干细胞(MSCs组)及生理盐水(对照组)的小鼠进行对比,采用ELISA法检测各组小鼠血清中IL-35的浓度;混合淋巴细胞培养法观察各组小鼠培养体系中淋巴细胞的增殖情况,采用ELISA法检测各组培养体系上清液中IL-35和IL-17A的表达情况;FCM检测各组培养体系中CD3~+T细胞、CD4~+T细胞、CD8~+T细胞、CD4~+CD25~+Treg细胞和树突状细胞(DCs)的比例。结果:1.小鼠脂肪来源间充质干细胞成功获取,过表达IL-35慢病毒载体成功转染间充质干细胞,转染后细胞上清中IL-35蛋白浓度可达389.39±9.45pg/ml。2.体内实验证实,IL-35-MSCs组小鼠血清IL-35的表达(72h结果为69.12±8.61pg/ml)明显高于MSCs组及对照组(P<0.05);混合淋巴细胞培养实验72h结果证实IL-35-MSCs组CD4~+CD25~+Treg细胞比例明显增高,CD3~+T细胞及CD4~+T细胞比例下降,DCs数量明显降低,与MSCs组及对照组比较有明显差异(P<0.05);ELISA法检测各组培养体系上清液中IL-35及IL-17A的表达量,结果显示IL-35-MSCs组IL-35的表达水平明显高于MSCs组及对照组(P<0.05);各组均有IL-17A的表达,IL-35-MSCs组与MSCs组IL-17A表达量明显低于对照组,且IL-35-MSCs组IL-17A表达量低于MSCs组,二者之间有明显差异(P<0.05)。结论:IL-35基因修饰间充质干细胞能够在小鼠体内有效表达IL-35,并能调节小鼠体内细胞免疫功能,产生免疫抑制效应,其机制可能是通过抑制DCs等抗原呈递细胞的生成,促进CD4~+CD25~+Treg细胞的增殖和分化,下调IL-17A的表达,从而实现抑制免疫反应,探索出诱导移植免疫耐受的新途径。