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目的:研究金线莲多糖(ARP)对小鼠脾淋巴细胞和巨噬细胞RAW264.7体外免疫活性的影响。方法:MTT法筛选ARP对小鼠脾淋巴细胞和巨噬细胞RAW264.7的安全浓度及检测ARP协同ConA、LPS对小鼠脾淋巴细胞体外增殖的影响;流式细胞仪检测ARP对小鼠脾淋巴细胞周期及对巨噬细胞RAW264.7凋亡的影响;Griess法检测ARP对小鼠脾淋巴细胞和巨噬细胞RAW264.7 NO产生量的影响;中性红法检测ARP对巨噬细胞RAW264.7吞噬活性的影响;ELISA法检测ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞因子(IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ)和巨噬细胞RAW264.7细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-10)的含量;RT-PCR检测ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞(IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ、TNF-α、T-bet、GATA3)和巨噬细胞 RAW264.7(TNF-α、IL-6、iNOS)mRNA表达水平;Western blot法检测ARP对巨噬细胞RAW264.7胞浆中IκB p65蛋白表达水平的影响。结果:1.ARP对小鼠脾淋巴细胞体外免疫活性的影响:MTT法检测结果表明,与细胞空白对照组比较,ARP组OD值升高(P<0.05),并呈一定的量-效关系,当ARP浓度为400μg/mL时,OD值最高;ARP与ConA或LPS共同作用小鼠脾淋巴细胞时,其OD值高于ConA、LPS单独刺激组(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示,与细胞空白对照组比较,ARP组Go/G1期小鼠脾淋巴细胞百分率降低(P<0.01),S期、G2/M期小鼠脾淋巴细胞百分率升高(P<0.01);Griess法检测结果表明,ARP可促进小鼠脾淋巴细胞产生NO,当ARP浓度达到50μg/mL时,与细胞空白对照组比较,差异极显著(P<0.01);ELISA法检测结果表明,ARP协同ConA诱导组IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ分泌量明显高于ConA单独刺激组(P<0.01);RT-PCR检测结果表明,ARP可提高ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ、TNF-α、T-bet、GATA3mRNA 表达水平,与细胞空白对照组比较,差异极显著(P<0.01)。2.ARP对巨噬细胞RAW264.7体外免疫活性的影响:MTT法检测结果表明,与细胞空白对照组比较,ARP组OD值明显升高,当ARP浓度达到25μg/mL时,差异显著(P<0.05);流式细胞仪检测结果表明,ARP可降低巨噬细胞RAW264.7凋亡比率;中性红法检测结果表明,ARP可显著提高巨噬细胞RAW264.7吞噬活性,当ARP浓度达到25μg/mL时,与细胞空白对照组比较,差异显著(P<0.05);Griess法检测结果表明,ARP可促进巨噬细胞RAW264.7产生NO,当ARP浓度为25μg/mL时,与细胞空白对照组比较,差异极显著(P<0.01);ELISA法检测结果表明,ARP可促进巨噬细胞RAW264.7分泌细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-10,与细胞空白对照组比较,差异极显著(P<0.01);RT-PCR检测结果表明,ARP可显著促进巨噬细胞RAW264.7中TNF-α、IL-6、iNOSmRNA表达,与细胞空白对照组比较,差异极显著(P<0.01);Western blot法检测结果表明,ARP可降低巨噬细胞RAW264.7胞浆中IκB p65蛋白表达。结论:1.ARP可提高小鼠脾淋巴细胞体外免疫活性,其作用机制可能与调控细胞增殖周期,促进小鼠脾淋巴细胞体外增殖以及通过上调转录因子T-bet、GATA3 mRNA表达水平从而促进Th1细胞因子(IFN-γ、TNF-α、IL-2)和Th2细胞因子(IL-4、IL-6)的分泌表达有关。2.ARP可提高巨噬细胞RAW264.7体外免疫活性,其作用机制可能与促进巨噬细胞RAW264.7增殖,降低其细胞凋亡比率,提高巨噬细胞RAW264.7吞噬活性,促进巨噬细胞RAW264.7产生NO,提高细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-10的分泌水平,TNF-α、IL-6、iNOSmRNA表达水平以及降低IκB p65蛋白的表达水平有关。