【摘 要】
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目的:本实验通过体外和体内实验研究初步探讨蜂毒素（Melittin）对人骨肉瘤143B细胞肺转移的作用以及与Wnt/β-catenin信号通路的关系,为蜂毒素治疗骨肉瘤肺转移的临床应用提供实验依据。方法:1.体外实验:划痕愈合实验和Transwell小室法检测不同浓度的蜂毒素对人骨肉瘤143B细胞的迁移和侵袭能力的影响;Realtime RT-PCR及Western blot法检测不同浓度的蜂毒素
【基金项目】
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国家自然科学基金委员会（项目编号：81573995）
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目的:本实验通过体外和体内实验研究初步探讨蜂毒素（Melittin）对人骨肉瘤143B细胞肺转移的作用以及与Wnt/β-catenin信号通路的关系,为蜂毒素治疗骨肉瘤肺转移的临床应用提供实验依据。方法:1.体外实验:划痕愈合实验和Transwell小室法检测不同浓度的蜂毒素对人骨肉瘤143B细胞的迁移和侵袭能力的影响;Realtime RT-PCR及Western blot法检测不同浓度的蜂毒素对人骨肉瘤143B细胞中Wnt/β-catenin信号转导通路中的关键因子（LRP5、β-catenin、MMP-2、cyclin D、c-Myc、survivin、MMP-9和VEGF）m RNA和蛋白表达水平的影响。2.体内实验:将人骨肉瘤143B细胞悬液接种于裸鼠左后肢胫骨骨髓腔内构建裸鼠胫骨骨肉瘤移植模型。成瘤后通过随机区组法分为5组:阴性对照生理盐水组、蜂毒素低剂量组、蜂毒素中剂量组、蜂毒素高剂量组、阳性对照多柔比星治疗组。瘤内注射干预4周后取材,通过计数肺表面结节,并结合HE染色法观察蜂毒素对肺转移灶的抑制作用;免疫组化及Western blot法观察蜂毒素对肺转移瘤组织中Wnt/β-catenin信号转导通路中的关键因子（LRP5、β-catenin、MMP-2、cyclin D、c-Myc、survivin、MMP-9和VEGF）蛋白表达水平的影响。结果:1.体外实验:划痕愈合和Transwell小室实验显示,与空白对照组比较,蜂毒素能明显抑制人骨肉瘤143B细胞的迁移和侵袭能力,随着蜂毒素浓度增大,抑制作用存在剂量依赖关系。Realtime RT-PCR和Western blot实验结果显示,蜂毒素能够下调人骨肉瘤143B细胞中的LRP5、β-catenin、MMP-2、cyclin D、c-Myc、survivin、MMP-9和VEGF m RNA和蛋白的表达水平。2.体内实验:蜂毒素能显著抑制裸鼠移植瘤的生长和减少肺转移结节数,随着浓度增大,抑制作用越明显。免疫组化及Western blot检测结果显示,与空白对照组比较,蜂毒素各浓度组肺转移瘤组织中的LRP5、β-catenin、MMP-2、cyclin D、c-Myc、survivin、MMP-9和VEGF的蛋白表达水平均下降。结论:蜂毒素在体外能抑制人骨肉瘤143B细胞的迁移和侵袭能力,体内能抑制人骨肉瘤143B细胞肺转移。随着浓度增大,抑制作用越明显。其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。
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