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肾上腺髓质素(adrenomedullin,AM)是降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)家族成员之一,由52个氨基酸组成。研究证实AM是一种炎性因子,但其参与慢性痛的机制尚未清楚。过去我们实验室利用AM作用离体培养的星形胶质细胞(astrocytes),发现星形胶质细胞能够被AM激活。有学者认为脊髓中星形胶质细胞和背根神经节(dorsal root ganglia,DRG)卫星胶质细胞(satellite glial cells,SGCs)是同一种细胞类型。基于这个思路,采用离体培养DRG的方法,观察AM能否激活卫星胶质细胞。脊髓中胶质细胞的激活如小胶质细胞(microglia)和星形胶质细胞被证实参与调节吗啡耐受和痛觉过敏。这是由于脊髓中促炎因子的表达上调,主要包括白细胞介素-1β(interleukin-1 beta,IL-2β)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF-α)等痛介质。然而,目前对于慢性吗啡能否诱导外周神经系统(peripheral nervous system,PNS)胶质细胞的活化研究较少。本文主要研究:1、AM对DRG卫星胶质细胞的作用(从形态和功能两个方面)。已发现疼痛发生时,DRG卫星胶质细胞激活。AM能使胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)表达增加,GFAP是卫星胶质细胞活化的标记物。2、激活MrgC受体(Mas-related gene(Mrg)C receptors)对慢性应用吗啡激活DRG卫星胶质细胞的作用。DRGP卫星胶质细胞激活是吗啡耐受的重要机制。因而想观察激活MrgC受体能否抑制卫星胶质细胞的激活。本实验采用离体组织培养,免疫荧光染色和免疫印迹(Western Blotting)等实验技术研究:(1)AM对离体培养的DRG卫星胶质细胞的作用;抑制卫星胶质细胞的活性对AM诱发DRG神经元中CGRP及nNOS表达的影响。(2)离体培养DRG,MrgC受体特异性激动剂牛肾上腺髓质素8-22(bovine adrenal medulla peptide 8-22,BAM8-22)对慢性应用吗啡诱导的DRG卫星胶质细胞的影响。结果显示:(1)外源加入AM作用离体DRG,卫星胶质细胞激活。加入AM受体拮抗剂AM22-52后,AM不再能激活卫星胶质细胞;AM作用离体DRG,神经元中CGRP及nNOS表达显著增加,加入卫星胶质细胞抑制剂氟代柠檬酸(fluorocitricacid,FC)作用离体DRG,AM不再能增加DRG神经元中CGRP及nNOS表达;(2)慢性吗啡作用离体DRG,免疫印迹结果显示,慢性吗啡使DRG中GFAP的蛋白表达水平显著升高。加入BAM8-22能抑制慢性吗啡引起的DRG中GFAP的蛋白升高。上述结果表明,AM可以激活DRG卫星胶质细胞,通过卫星胶质细胞使神经元中CGRP及nNOS表达增多。激活MrgC受体能够抑制慢性吗啡引起的卫星胶质细胞活化。