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目的本研究旨在探讨环状RNA circAGFG1在三阴乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)中的表达,分析其表达量与TNBC患者的临床病理特征及预后的关系,并进一步阐明其可能作为miR-195-5p的竞争性内源RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)调控靶基因CCNE1的表达进而促进了TNBC发生发展的分子机制,为寻找诊断和治疗TNBC的新的生物标志物提供科学依据。方法采用转录组测序(RNA sequencing,RNA-seq)技术对4对TNBC组织及癌旁组织进行分析,得到差异表达的circRNA和mRNA表达谱。采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)实验验证circAGFG1和CCNE1在40对TNBC癌组织及癌旁组织中的表达;原位杂交(in situ hybridization,ISH)实验进一步检测circAGFG1在TNBC组织中的表达。在体外,应用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)、5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(5-Ethynyl-2’-deoxyuridine,EdU)和克隆形成实验检测TNBC细胞的增殖能力;运用划痕和Transwell实验检测TNBC细胞的迁移及侵袭能力;利用Hoechst 33342和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling,TUNEL)检测细胞凋亡;采用流式细胞术检测细胞周期和凋亡;蛋白质印记法(western blot)检测凋亡相关蛋白(Bcl-2,Bax和Caspase 3)以及CCNE1和细胞周期相关蛋白(CDK2,RB,pRB和F2F1)的表达。在体内,构建裸鼠移植瘤生长转移模型检测肿瘤发生;采用苏木精-伊红染色(Hematoxylin and Eosin,HE)检测肺转移和血管生成;利用免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)和western blot检测CCNE1及细胞周期相关蛋白的表达。机制上,我们首先应用生物信息学预测了circAGFG1和CCNE1与miR-195-5p的结合位点,然后运用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)观察circAGFG1和miR-195-5p在细胞中的定位;接着应用双荧光素酶报告基因实验初步验证circAGFG1和CCNE1能够与miR-195-5p的结合;进一步采用RNA免疫共沉淀(RNA immunoprecipitation,RIP)和RNA pull-down实验验证circAGFG1与miR-195-5p的结合;最后采用qRT-PCR检测circAGFG1、miR-195-5p和CCNE1三者之间的关系,western blot和免疫荧光(immunofluorescence,IF)检测CCNE1及细胞周期相关蛋白的表达。结果RNA-seq结果显示circAGFG1在TNBC组织中显著高表达,与CCNE1共表达,qRT-PCR验证结果与测序结果一致;ISH结果显示circAGFG1的表达与TNBC患者的预后呈负相关。CCK-8、EdU和克隆形成实验结果表明过表达circAGFG1可促进TNBC细胞的增殖;划痕和Transwell实验结果显示上调circAGFG1能够促进TNBC细胞迁移和侵袭;而敲低circAGFG1则抑制了TNBC细胞的增殖、迁移及侵袭。Hoechst 33342、TUNEL实验和流式细胞术结果显示下调circAGFG1可诱导细胞凋亡并导致细胞周期阻滞。体内实验结果表明上调circAGFG1可促进TNBC的生长、血管生成及肺转移,而下调circAGFG1则呈现相反的效应。生物信息学预测结果显示circAGFG1和CCNE1与miR-195-5p均具有结合位点;双荧光素酶报告基因实验证实了circAGFG1和CCNE1均能够被miR-195-5p靶向结合;FISH结果显示circAGFG1和miR-195-5p共定位于细胞质;RIP和RNA pull-down实验进一步证实了circAGFG1与miR-195-5p的能够相互结合。更重要的是,EdU和Transwell挽救实验结果显示,上调miR-195-5p能够逆转过表达circAGFG1引起的促进TNBC细胞增殖和侵袭的作用,而下调miR-195-5p能够拮抗敲低circAGFG1介导的细胞增殖和侵袭的抑制作用。qRT-PCR实验也验证了circAGFG1、miR-195-5p和CCNE1三者之间的相互调控关系;最后western blot和IF实验证明了circAGFG1可通过miR-195-5p调控CCNE1及下游细胞周期相关蛋白的表达进而影响TNBC的发生及发展。结论环状RNA circAGFG1在TNBC组织中显著高表达,其表达量与CCNE1呈正相关。在体内外上调circAGFG1的表达可促进TNBC的增殖、迁移、侵袭、血管生成及肺转移,而下调circAGFG1则具有抑制作用,并可诱导细胞凋亡,导致细胞周期阻滞。circAGFG1通过miR-195-5p作为ceRNA调节靶基因CCNE1及细胞周期相关蛋白的表达进而调控TNBC的发生发展。