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目的:研究体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)移植到碘酸钠注射大鼠的视网膜下后的存活、分化情况。
方法:采用全骨髓培养法体外培养Wistar大鼠的MSCs,并经流式细胞仪鉴定后,用病毒上清液转染EGFP标记MSCs。经尾静脉注射4% NaIO340mg/kg破坏Wistar大鼠的RPE细胞。25只大鼠右眼为实验眼,经玻璃体腔注射MSCs细胞悬液到视网膜下,左眼为对照眼,视网膜下腔注射等量培养液。发生大量视网膜下出血或玻璃体出血的大鼠弃去不用。术后1周、5周分别处死10只大鼠,摘除眼球行冰冻切片后用免疫荧光显微镜直接观察MSCs在视网膜内的分布,并用免疫荧光染色的方法观察术后5周MSCs的分化情况。
结果:注射过NaIO3的大鼠视网膜发生变性,RPE细胞数量减少,光感受器细胞外节出现空泡样结构,厚度变薄,外核层光感受器细胞数量减少。MSCs的EGFP转染比例可达到76.9%,术后第一周可见大量MSCs整合入视网膜位于光感受器细胞层,五周后可观察到的细胞数量大幅减少,主要迁移至视网膜下区域,并表达角蛋白(pan-CK)、视紫红质(rhodopsin)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。
结论:MSCs植入碘酸钠注射大鼠视网膜下腔后可存活,并表达RPE细胞、光感受器细胞和星形胶质细胞的特异性标志。