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课题组前期发现,大肠杆菌麦芽糖结合蛋白(maltose binding protein,MBP)具有免疫增强作用,尤其是当MBP与卡介苗(BCG)联合免疫小鼠后,能够协同促进Th1活化。进一步研究发现,MBP可通过TLR2和TLR4信号诱导巨噬细胞向着M1型分化;通过TLR2/TLR4/TLR9 cross-talk直接诱导CD4~+T细胞向Th1活化。树突状细胞(Dendritic cell,DC)作为体内提呈功能最强大的抗原提呈细胞,在固有免疫应答和适应性免疫应答过程中发挥着举足轻重的作用。然而,MBP联合BCG对DC细胞的活化、成熟的影响并不清楚,以及通过DC细胞对CD4~+T细胞的极化方向,尚未进行探讨。本研究为了探讨MBP联合BCG是否影响DC的成熟,免疫磁珠分选获取纯的DC细胞,流式细胞术检测DC细胞CD80、CD86和MHC-II分子的表达。结果显示,MBP联合BCG协同上调DC细胞表面共刺激分子CD80、CD86及MHC-II分子的表达,增加IL-12p70分泌水平,诱导DC细胞成熟、活化。为了探讨MBP联合BCG刺激能否通过DC间接诱导Th1细胞活化,将纯化的DC细胞和CD4~+T细胞共培养,CCK8方法和ELISPOT检测了共培养细胞的增殖能力和细胞因子。结果发现,MBP联合BCG显著增强CD4~+T细胞的增殖能力,促进DC细胞和CD4~+T细胞共培养过程中IFN-γ的产生,而IL-4的分泌水平无明显变化,提示MBP联合BCG通过DC促进Th1细胞活化。本实验进一步通过TLR2-/-或TLR4-/-小鼠来源的DC细胞和CD4~+T细胞,以TLR2/4作为切入点,深入探讨MBP联合BCG诱导DC细胞成熟及间接促进Th1细胞活化的分子机制。结果发现,DC细胞缺失TLR2/TLR4分子,MBP联合BCG不能上调DC细胞共刺激分子表达和MHC-II分子的表达,DC与CD4~+T细胞共培养的增殖能力降低,细胞因子IFN-γ的分泌下降,提示下调CD4~+T细胞向Th1活化的能力。体内实验也发现,MBP联合BCG在体内可上调正常小鼠DC细胞CD80、CD86和MHC-II分子的表达,而MBP联合BCG在体内均不能上调TLR2-/-或TLR4-/-小鼠DC细胞的CD80、CD86和MHC-II分子的表达。同时,MBP联合BCG体内促进正常小鼠CD4~+T细胞的增殖能力和增加IFN-γm RNA的表达,但MBP联合BCG对TLR2-/-或TLR4-/-小鼠CD4~+T细胞的增殖能力无明显影响,未能上调IFN-γm RNA的表达,体内实验进一步验证了体外实验结果。综上所述,MBP联合BCG通过TLR2和TLR4诱导DC细胞活化和成熟,且间接促进Th1细胞活化。本研究为MBP联合BCG作为免疫增强剂的应用提供实验依据和理论基础,为研究DC细胞TLR2/TLR4分子在诱导Th1活化的作用机制提供新的研究思路,为进一步在肿瘤的预防及治疗过程中提供新的作用靶点。