结肠癌转移相关的miRNA差异性表达及其靶基因的确定

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[目的]肿瘤转移是现在恶性肿瘤致死性的主要原因。肿瘤的转移机制极为复杂,是众多因子相互协调及共同作用的过程。’niRNA是近些年来新发现一类的能够调控其靶基因表达水平的小RNA分子家族。目前,miRNA的功能研究主要集中于生长发育、肿瘤发生、细胞增殖、细胞凋亡,尚无报道其参与肿瘤转移,本研究旨在研究niRNA在肿瘤转移中的调控作用及其调控机制。[方法]1.采用miRNA芯片和Northern blot方法在人结肠癌低转移细胞SW480和人结肠癌高转移细胞SW620筛选肿瘤转移相关miRNA,并在结肠癌标本中运用Northern blot方法验证肿瘤转移相关miRNA。2.利用表达谱芯片和生物信息学方法筛选候选miRNA的靶基因,并进行荧光报告载体的验证,而且在RNA水平和蛋白水平检测]miRNA对靶基因的作用效果,进而综合分析miRNA参与肿瘤转移的调控网络。[结果]1.通过对miRNA芯片结果的分析发现:miR-lOa在人结肠癌低转移细胞SW480中表达,而在人结肠癌高转移细胞SW620中未表达,Northern blot实验验证了SW480、SW620的芯片结果,并且,Northern blot结果还显示:在结肠癌标本中未转移组,miR-10a表达量要高于转移组。2.利用表达谱芯片(共7267个人类基因,包含凋亡相关基因、肿瘤相关基因、信号转导相关基因、肝酶代谢相关基因)结合生物信息学的方法,我们筛选到miR-10a的3个候选靶基因ACTG1、CNN1、EPHA4。荧光报告载体实验验证了miR-10a与候选靶基因ACTG1的直接作用关系。并采用RT-PCR和Western Blot分别在RNA水平和蛋白水平验证了miR-10a对靶基因ACTG1抑制作用。[结论]以miR-10a为代表,本研究首次挖掘niRNA在肿瘤转移过程中的作用,并找到、验证了miR-10a的直接作用靶基因ACTG1,进一步阐明了miRNA参与肿瘤转移的途径。对niR-10a在肿瘤转移调控功能及调控机制的研究还深化了我们对于肿瘤细胞转移特性及其调控机制的理解,同时也为恶性肿瘤的防治提供一条新的可能途径。
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