四种淡水鱼类组蛋白H2B及其衍生抗菌肽HLP-1的基因克隆、特征分析和原核表达

来源 :河南师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:rmprinthecb
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
水生动物病害的防治问题一直是人们关注的重点,但目前很少有特效的药物能对抗水生动物病害,抗菌肽的出现给此类问题带来了新的突破。组蛋白H2B及其衍生的抗菌肽HLPs在鱼类免疫、抗菌方面的研究已越来越被人们关注,此类研究在对水生动物自身免疫及疾病防治方面具有广阔的应用前景,本研究旨在对组蛋白H2B及其衍生的抗菌肽HLP-1的序列特征进行分析,为进一步从分子水平上阐明组蛋白H2B及其衍生的抗菌肽HLP-1的来源及抑菌机制奠定基础,另外,原核诱导表达的研究也对抗菌肽的生产提供了参考,为组蛋白类抗菌肽的抑菌活性研究及较高抗菌活性的抗菌肽筛选提供了研究基础。本研究根据GenBanK中的斑马鱼(Danio rerio)等鱼类H2B基因保守性序列设计引物,从鳙鱼(Aristichthys nobilis)、草鱼(Ctenopharyngodon idellus)、鲤鱼(Cyprinuscarpio)、鲫鱼(Carassius auratus)四种鱼肌肉中扩增出组蛋白H2B基因(全长375bp),并分别构建了不同鱼类组蛋白H2B基因的质粒载体,克隆载体,获得组蛋白H2B基因序列。利用DNAMAN软件进行了核酸序列相似性比对,结果显示其同源性高达90%以上。通过在线分析软件分析了其编码的不同蛋白质的等电点、分子量、二级结构和三级结构等相关分析。结果显示:H2B编码的蛋白质分子量在10KDa到15KDa之间;二级结构预测显示,组蛋白H2B主要由α螺旋和无规卷曲结构组成;三级结构预测显示组蛋白H2B含有丰富的α螺旋结构,含量在50%以上。本实验通过目的基因及载体PET-32a(+)的双酶切构建了表达载体,并成功转化至大肠杆菌BL-21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导,通过SDS-PAGE电泳,结果表明鲫鱼、鲤鱼H2B基因在原核细胞大肠杆菌BL-21(DE3)中成功表达。基于鳙鱼、草鱼、鲤鱼和鲫鱼H2B基因,设计引物,扩增组蛋白H2B衍生的抗菌肽HLP-1基因,通过相关在线网站及相关软件对推导的抗菌肽HLP-1进行了蛋白质基本特性分析,结果显示:分子量在2KDa左右,含大量阳离子,带正电性;二级结构显示其蛋白由无规卷曲和α螺旋结构组成;三级结构显示抗菌肽HLP-1位于组蛋白H2B的氨基端。进行目的基因和载体PET-32a(+)的双酶切,然后连接,成功转入感受态细胞BL-21(DE3)中,经IPTG诱导,通过SDS-PAGE电泳检测,表明了草鱼HLP-1基因成功进行了原核表达。本研究成功克隆了组蛋白H2B基因及其衍生的抗菌肽HLP-1基因,为鱼类的组蛋白H2B基因及其衍生的抗菌肽HLP-1基因的深入研究提供了基础,并基于所获基因推导的蛋白序列做了特征分析,为从分子水平上深入研究组蛋白H2B及其衍生的抗菌肽HLP-1的抑菌机制创造了条件;构建的鲫鱼和鲤鱼组蛋白H2B及草鱼组蛋白H2B衍生的抗菌肽HLP-1原核表达质粒,在大肠杆菌BL-21(DE3)中经IPTG诱导得以表达,并经电泳分离到目的蛋白,为今后筛选高活性抗菌肽提供了研究基础。
其他文献
随着我国新农村建设的深入,农村文化建设也取得了很大成效。但是从总体来看,仍然存在不和谐之音。据媒体报道:在山西临汾市尧都区的乔李乡、洪桐县的甘亭镇、河南固始县的段集乡等农村集市上,有所谓的“马戏团”、“杂技团”、“艺术团”,为了招揽观众,疯狂上演脱衣舞。据了解,像这样的淫秽表演在全国各地农村屡有上演,甚至在泰山庙会上都有出现。  台上乌烟瘴气,台下嘘声四起。面对有伤风化的场景,深受传统伦理道德影响
二氧化锡(SnO2)是一种宽禁带n型半导体,常温下其禁带宽度Eg达到3.6eV,激子束缚能高达130meV,是一种重要的无机功能材料,被广泛应用于气敏元件、透明电极、半导体元件、催化剂、功能
本论文着力制备二维NiA1氢氧化物-聚吡咯-银(LDH-PPy-Ag)复合材料和二维NiA1氧化物-聚吡咯-银(LDO-PPy-Ag)复合材料,以此复合材料修饰电极表面制备修饰电极LDH-PPy-Ag/GCE和LDO-PPy-Ag/GCE,构筑一种性能优良的H202传感器。具体研究工作如下:采用尿素法制备了摩尔比为3:1的NiA1 LDH,并将其与不同量的聚吡咯复合,制得NiA1氢氧化物-聚吡咯复
学位