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目的：分别在细胞水平和体外检测PTEN与Mi-2β/CHD4之间的相互作用，进一步明确其相互作用的结构域。研究方法：本课题拟在已有工作的基础上，利用GST pull-down、免疫共沉淀等方法，检测PTEN与Mi-2β/CHD4之间的相互作用，通过构建截短体，明确结合核心结构域。采用PCR方法扩增CHD4的染色质调节区(CHD4-C)、解螺旋酶模序(CHD4-H)及DNA结合区(CHD4-D)基因片段，将目的基因片段插入原核表达载体pGEX-5T构建GST标签的重组质粒，阳性克隆行DNA序列测定。IPTG诱导GST-CHD4-C、GST-CHD4-D和GST-CHD4-H原核表达，谷胱甘肽琼脂糖珠纯化融合蛋白，表达产物Western blot进行鉴定。用纯化后GST-CHD4-C、GST-CHD4-D和GST-CHD4-H融合蛋白与PTEN-HIS进行GST pull-down检测CHD4蛋白与PTEN蛋白在体外相互作用及作用结构域。将HA-PCMV、HA-CHD4真核质粒转染到293T细胞中，应用免疫共沉淀技术检测CHD4蛋白与PTEN蛋白在细胞水平的相互作用。结果：成功纯化了较高纯度的GST、GST-CHD4-C、GST-CHD4-D和GST-CHD4-H融合蛋白，并进行GST pull-down结果表明CHD4蛋白与PTEN蛋白在体外相互作用且作用在CHD4染色质结合域端；免疫共沉淀技术检测CHD4蛋白与PTEN蛋白在细胞水平存在相互作用，为进一步研究CHD4蛋白在染色质重塑中的作用提供了实验基础。