[目的]构建恒河猴TRAM-shRNA腺病毒载体,鉴定TRAM-shRNA对恒河猴未成熟树突状细胞(immature dendritic cell,imDC)TRAM基因表达的抑制作用。[方法]1.构建TRAM-shRNA重组干扰质粒并进行阳性克隆PCR鉴定及测序；2.用HEK293细胞包装TRAM-shRNA腺病毒载体,并用Adeno-XTM纯化试剂盒纯化病毒,终点稀释法检测腺病毒滴度；3.采集恒河猴骨髓血,使用淋巴细胞分离液分离恒河猴单个核细胞；4.培养获得的细胞并用IL-4和GM-CSF诱导其分化为imDC;5.重组腺病毒载体感染恒河猴imDC,选取绿色荧光蛋白表达较好的细胞组提取总蛋白,BCA法检测蛋白浓度；6. Western Blot鉴定shRNA对imDC中TRAM基因表达的抑制作用。[结果]经PCR扩增及电泳分析检测见阳性克隆PCR片段大小与理论条带大小一致。测序结果显示阳性转化质粒中恒河猴TRAM-shRNA序列与前期设计合成的TRAM-shRNA序列一致,进一步确定了PCR扩增产物为我们预期想得到的TRAM-shRNA片段,表明成功构建重组干扰质粒。经HEK293细胞包装并纯化后测定TRAM-shRNA重组腺病毒滴度为2.5×1010PFU/ml。重组腺病毒转染imDC48h后提取总蛋白,Western blot检测可见32kD处出现目的条带,在43kD处可见β-actin内参蛋白表达,通过灰度值分析,TRAM-shRNA干扰组TRAM蛋白表达较阴性对照组表达灰度值降低98.08%,TRAM-shRNA干扰组TRAM蛋白表达较空白对照组表达灰度值降低97.73%。[结论]成功构建恒河猴TRAM-shRNA腺病毒载体,TRAM-shRNA能够进入恒河猴imDC内并抑制TRAM基因的表达。