脂肪沉积多少是评价动物肉品质好坏的重要指标,猪作为一种与人们生活密切相关的经济动物,被认为是研究脂肪沉积机制的良好模型。前人研究表明,DNA甲基化可以参与调控动物脂肪沉积过程,但其具体调控机制目前还不清楚。本文旨在探究DNA甲基化对猪脂肪沉积的调控作用,为阐明脂肪沉积机制及改善动物肉质品质提供参考。为了探明DNA甲基化对猪前体脂肪细胞增殖分化的影响,本试验首先采取1日龄仔猪的背部和颈部皮下脂肪组织,采用胶原酶消化法分离猪原代前体脂肪细胞。然后用MTT法检测添加甲基化抑制剂后前体脂肪细胞的增殖情况,油红O染色法观察及定量添加甲基化抑制剂后成熟脂肪细胞的脂滴生成情况,qRT-PCR法检测前体脂肪细胞增殖分化过程中相关基因和甲基转移酶的表达水平。以晋汾白猪为研究对象,分析脂肪组织全基因组DNA甲基化程度与背膘厚、肌内脂肪含量以及血清中TG、T-CHO、HSL和LPL指标的影响。以脂肪型猪种马身猪和瘦肉型猪种大白猪为研究对象,采用BSP技术和qRT-PCR法测定PPARγ等基因的DNA甲基化程度和mRNA水平表达,探究DNA甲基化程度对相关基因表达及脂肪沉积的影响。试验结果如下:1、添加甲基化抑制剂5-Aza-dc,可以显著提高猪原代前体脂肪细胞的增殖率;8μmol/L的5-Aza-dc作用细胞24 h,细胞的增殖率最高;DNMT1可能在5-Aza-dc促进前体脂肪细胞增殖的过程中发挥主要作用。2、添加5-Aza-dc,可以显著提高猪前体脂肪细胞中C/EBPα等基因的表达,增加脂滴生成。3、脂肪组织的DNA甲基化程度越低,个体的背膘越厚。DNA甲基化程度与背膘厚呈极显著负相关,DNA甲基化可以影响猪背部脂肪组织形成。4、在猪的脂肪组织中,相关基因的DNA甲基化程度越高,其表达量越低。猪脂肪沉积相关基因PPARγ、Leptin和FABP₄的表达量与其DNA甲基化程度成反比。综上所述,DNA甲基化可以影响猪的脂肪沉积过程;两品种猪脂肪沉积能力差异可能与相关基因的DNA甲基化调控有关。