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[研究目的]本研究旨在通过比较麦冬皂苷B(Ophiopogonin B,OP-B)对非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)细胞株 A549、H460 及其耐药细胞株 A549/DDP、A549/PTX 的抑制作用差异,以筛选出OP-B的敏感细胞株,并在此基础上探究造成对OP-B敏感差异的相关机制,进而为中药改善NSCLC的临床耐药提供新的思路和方向。[研究方法]第一部分:通过CCK8实验,检测麦冬皂苷B对H460、A549、A549/DDP和A549/PTX四种人肺腺癌细胞的抑制作用程度,筛选出对OP-B最为敏感的细胞株。第二部分:主要分为OP-B毒性实验和药效实验。在毒性实验中,通过计算脏器指数、检测肝肾组织中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)和肌酐(CRE)的酶活性率;同时通过H&E染色技术,评估高、低剂量麦冬皂苷B给药条件下对BALB/c雄性裸鼠心、肝、脾、肺、肾的毒性作用。在药效实验中,通过计算肿瘤抑制率以评价OP-B对A549/DDP移植瘤的抑制作用效果。第三部分:主要通过电子显微镜检测细胞形态、免疫荧光技术检测Cox2蛋白的表达情况、流式细胞术检测细胞中线粒体膜电位改变情况、qRT-PCR检测焦亡经典通路中pro-Caspase-1、Caspase-1、IL-1β、GSDMD 和 GSDMD-N 基因的表达情况和运用 Western blot技术检测细胞中焦亡相关蛋白GSDMD-N的表达情况,探究OP-B作用于A549、H460和A549/DDP三种细胞后,细胞焦亡发生的程度,从而揭示A549/DDP细胞对OP-B更加敏感的原因。[研究结果]第一部分:首先证实了实验所用A549/DDP和A549/PTX耐药细胞株均具备耐药性,且耐药倍数分别为30.6和13.93倍;其次,证实了在A549、H460、A549/DDP和A549/PTX四种细胞中,OP-B对A549/DDP的抑制效果最为显著;最后,发现OP-B和DDP联用可以增强A549/DDP细胞对DDP的敏感性(该发现可进一步深入探究OP-B提高A549/DDP耐药细胞对DDP敏感性的作用机制,本研究针对该点暂不进行论述)。综上,第一部分通过CCK8实验筛选出了 A549/DDP为对OP-B最为敏感的细胞株。第二部分:首先通过毒性实验证实了 OP-B在1.5mg/kg和3mg/kg剂量下对BALB/c雄性裸鼠的心、肝、脾、肺和肾脏等均无显著毒副作用;再者,通过药效实验证实了相对于A549皮下移植瘤,OP-B对A549/DDP皮下移植瘤的抑制程度更为显著(与第一部分细胞实验所得结论一致)。第三部分:首先通过电镜实验证实了 OP-B可以诱导H460、A549和A549/DDP三种细胞发生焦亡,且诱导A549/DDP细胞发生焦亡的程度最为显著。镜下观察到细胞出现不同程度的肿胀,并明显伴有细胞质膜破裂和气泡状突出物形成等典型的焦亡形态学特征;其次,由于细胞焦亡为一种炎性死亡方式,故通过免疫荧光、流式细胞术等方法检测Cox2、线粒体膜电位变化和LDH释放率等炎性指标,发现OP-B作用下,相对于A549和H460细胞,A549/DDP细胞中Cox2蛋白的表达、线粒体膜电位降低程度和LDH释放率最为显著。进一步证实OP-B可诱导A549/DDP细胞发生更为显著的焦亡;最后,qRT-PCR和Western blot实验进一步证实了,相对于A549细胞,OP-B可通过Caspase-1/GSDMD经典焦亡通路诱导A549/DDP细胞发生更为显著的焦亡。[结论]①OP-B可以显著抑制A549/DDP耐药细胞/移植瘤的生长;②其作用机制可通过激活A549/DDP细胞中Caspase-1/GSDMD经典焦亡通路,进而诱导A549/DDP细胞发生显著的焦亡。