将未活化的C-H键进行功能化是化学上梦寐以求的反应，这类反应可以将烷烃功能化，创造出众多极其重要的化学中间体，例如醇、酮、胺。其中，过渡态金属法是目前催化C-H键胺化反应最为成功的方法，但仍存在着催化剂昂贵、操作繁琐等问题，因此亟待开发更加绿色、高效的C-H胺化新方法。生物催化具有选择性高、反应条件温和、环境友好等特征，已经发展成为医药工业中替代或拓展传统化学合成的重要方法。由于C-H胺化反应包含C-H键的羟化、脱氢和胺化步骤，仅仅通过单个酶的作用很难实现C-H键的高效胺化反应，因此考虑将不同的酶组合起来，以实现更高要求的合成目标。　　本文构建了一种新型的多酶级联催化方法，可实现底物环己烷中C-H键的胺化。反应中未活化的C-H键首先被P450单加氧酶羟化，过程中氧气作为氧化剂，同时偶合葡萄糖脱氢酶(BmGDH)或木糖醇脱氢酶(PsXDH)实现辅酶NADPH的再生;其后利用以NAD+依赖型的醇脱氢酶(ScCR)及新型的胺脱氢酶(AmDH)完成中间产物环己醇的氧化及胺化，后两步反应可以构成一个内在的辅酶(NAD+/NADH)循环系统。这种将烷烃转化为胺的多酶级联新策略，解决了转氨酶级联系统中需添加过量有机胺供体而造成目标产物（胺）的分离十分困难的难题，只需添加无机氨水作为氨供体，反应体系更为清洁绿色。　　本文通过分子克隆、蛋白表达获得了该级联反应中的四种酶，分别考察了反应条件，包括缓冲液种类、浓度和pH，对羟化反应和胺化还原反应的影响。同时分析了干扰粗酶级联反应的原因是由于提取液中内源NADH氧化酶对于还原型性辅酶的竞争作用。在此基础上，通过一锅两步反应，成功的协调体系中的相关酶，同时避免NADH氧化酶对辅酶循环系统的干扰，使得最后环己胺的浓度可达14.9mM，中间产物环己醇的转化率达到92.5％。另外，本研究也尝试了整细胞的级联催化，通过双质粒系统成功实现了目标酶的共表达;在两相整细胞催化反应中，调节反应pH，从而保证胺化步骤的顺利进行;在制备级(100mL)规模的反应中环己胺的浓度可达2.91mM，中间产物的转化率达到81％。这些结果表明利用多酶级联催化可有效的完成烷烃中C-H键的胺化。