论文部分内容阅读
血红铆钉菇（Gomphidius Rutilus）为东北地区著名食用菌，其子实体尚不能人工培养获得，这大大制约了血红铆钉菇的深度开发和利用。但可通过液体深层发酵的方法获得其菌丝体。基于此，本研究在优化液体发酵条件的基础上获取血红铆钉菇菌丝体，纯化菌丝体多糖，并进一步考察其生物学活性，为血红铆钉菇菌丝体多糖（GRMP）的进一步开发与利用奠定研究基础。首先，结合单因素考察和正交试验结合优化获得适于血红铆钉菇菌丝体发酵的液体培养基为：蔗糖30g/L，蛋白胨3g/L，MgSO40.5g/L，K2HPO41.5g/L，KH2PO40.2g/L，ZnSO40.03g/L，MnSO40.03g/L。使用优化培养基后，菌丝体产量可达8.66±0.26g/L，为优化前的1.5倍。优化培养条件为：以接种量为12.5%（v/v）的种子培养液（pH9.0）接种于装液量为200mL培养基/500mL三角瓶中，180r/min28℃振荡培养7d。此培养条件下，菌丝体产量可达9.32±0.15g/L。采用水提醇淀法提取菌丝体多糖。采用响应面设计优化提取工艺条件为：提取温度为95.44℃，提取时间为2.86h，料液比为1:20.02，提取次数3次。在此条件下，粗多糖提取率可达17.69%（w/w）。依次采用分级冻融、蛋白酶水解和Sevag萃取对水溶性粗多糖进行脱蛋白，DEAE-Cellulose DE-52离子交换层析对GRMP进行纯化分级，分离得到GRMPW和GRMPS两个级份。再利用SepharoseCL-6B凝胶层析对GRMPW和GRMPS进行纯化，各自得到一个级分，但分散度较大，说明分子量分布较广。各级份经过紫外检测，均无蛋白特征吸收峰。GRMPW和GRMPS经红外检测，发现具有多糖的醛基特征吸收峰和硫酸根的特征吸收峰，说明此多糖应具有一定生物学活性。HPLC对GRMPW和GRMPS进行单糖组分测定，结果发现两种组分均由葡萄糖和木糖组成，其葡糖糖木糖组成比例分别为0.46:1和0.43:1，且GRMPS的单糖含量均高于GRMPS。进一步对GRMPW和GRMPS进行抗氧化活性、抗肿瘤活性和淋巴细胞转化能力的体外研究。结果显示：GRMPW和GRMPS对超氧自由基、羟自由基和DPPH自由基均具有一定的清除能力，其中以GRMPW对羟自由基的清除效果最为明显，其它的清除效果和总还原力相对较低；几乎没有体外抗肿瘤活性；对淋巴细胞增殖具有明显的促进作用，但与ConA的协同作用效果不佳。