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干扰素(Interferon,IFN)是在一定干扰素诱导剂的诱导下,由细胞分泌产生的具有抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等多种生物学活性的蛋白质。α干扰素(Interferon alpha,IFN-α)主要由单核一吞噬细胞产生,是天然免疫和获得性免疫的桥梁,可以激活NK细胞的细胞毒性并促进其增殖,调节机体免疫。它具有抗病毒作用,既可以与疫苗配合使用,增强免疫效果,也可以单独使用,提高动物的免疫机能,治疗猪病毒性疾病。本研究是在前期成功构建重组猪α干扰素酵母菌的基础上,对重组猪α干扰素的表达培养量进行放大,在50 L发酵罐进行培养,然后用5%的甘露醇作为冻干保护剂进行冻干,最后,将冻干的重组猪α干扰素进行安全性试验和对PRV的预防性试验。本试验中,我们将猪α干扰素基因修饰的重组酵母菌,接种于50 L的发酵罐内,选用BSM基础培养基和PTM1微量元素,选用优化的发酵条件:种子液的最佳培养时间为24 h,接种量为5%,诱导前发酵液的pH为5,温度为30℃,诱导开始调整pH至6.0,温度调节到28℃,发酵液的体积为一般不超过发酵罐体积的2/3为宜。大罐发酵所得的猪α干扰素,采用5%的甘露醇作为冻干保护剂进行冻干,以解决该制品热稳定性差、不易长期保存和远距离运输等问题。试验采用细胞病变抑制法在vero细胞单层上测定猪α干扰素抗病毒效价,用含100个TCID500 PRV攻毒后观察结果,结果表明,重组猪α干扰素抗PRV的活性为4.9×107U/L。在(广东省)广东华农温氏连州分公司、(福建省)福建省漳州温氏农牧有限公司南靖畜牧分公司及(广西自治区)贺州广东温氏畜禽有限公司属下猪场进行基因工程猪α干扰素临床安全性试验,分别在哺乳仔猪、断奶仔猪、后备母猪、经产母猪及种公猪身上以推荐使用剂量、超剂量和推荐使用剂量重复注射试验猪,通过监测接种试验猪的精神状态、行为情况和采食饮水及生长性能,注射局部与全身反应等临床情况,考察该中试产品的安全性,试验结果显示所有猪只表现正常、呼吸正常、消化正常、饮水正常、无任何其他如跛行等不良反应。在实验室条件下,用重组猪α干扰素对猪伪狂犬病进行预防试验。将20头经ELISA鉴定为伪狂犬病阴性的30日龄断奶仔猪随机分为A、B、C、D 4个试验组,每组5只。A组为空白对照组,B组为干扰素对照组,C组为干扰素预防组,D组为病毒对照组。B、C组注射重组猪α干扰素20万IU/头,A组注射等量生理盐水。3天后C、D组同时进行攻毒试验,并观察一周。攻毒后24 h,D攻毒组最先出现临床症状,5只猪攻毒后第2天体温均升高到40℃以上,随后出现发抖、震颤、咳嗽、拉稀等症状,发病率100%。攻毒后第5天C组干扰素预防组有3只猪体温升高。B组和C组均无明显临床症状。对猪只进行解剖可见,D组可见肺淤血、肝表面有坏死点、脑膜出血,病理切片结果同样显示A~C组无异样,D组有典型的肺脏、肾脏淤血、水肿和淋巴细胞增生。综上所诉,本试验在50 L发酵罐内成功表达重组猪α干扰素,并将发酵上清液全部冻干,放在2℃~8℃保存备用。在全国3个省份的4个猪场进行安全性试验,在实验室条件下对猪伪狂犬病进行了预防试验,证明该制品安全、无副作用,其对伪狂犬病有较为显著的预防作用,为重组猪α干扰素大规模生产并用于猪病毒性病预防奠定基础。