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背景:卵巢癌在女性最常见的恶性肿瘤中排名第七,严重威胁女性生殖健康。其特点是发病机制隐蔽、漏诊、复发率高、预后差。在临床上,一线治疗优先采用以紫杉醇为基础的化疗进行减瘤手术。残酷的事实是,女性患者由于肿瘤细胞的扩散和耐药性而容易复发。在这种情况下,结合传统方法开发新的治疗策略有助于提高治疗质量。在众多的药物资源中,植物类化合物具有多靶点功能潜力、应用历史悠久、应用广泛等独特优势。以前的研究已经揭示了生物活性植物成分在卵巢癌中的治疗作用。这些天然成分可作为初始治疗的一部分或维持治疗的辅助选择,进一步减少肿瘤和转移负担。我们从植物黄精内生真菌Phomopsis sp（拟茎点霉菌）中提取的一种代谢物,因其含有壬烯内酯结构,推测其具有显著的抗肿瘤活性,并将其鉴定为Epoxycytochalasin H。本研究探讨了Epoxycytochalasin H对人卵巢癌细胞系A2780的抗肿瘤作用及作用机制。我们的数据表明,Epoxycytochalasin H显著降低卵巢癌细胞增殖,诱导细胞凋亡。目的:研究天然化合物Epoxycytochalasin H对人卵巢癌A2780细胞的作用效果及机制。方法:1.分别用不同浓度的Epoxycytochalasin H处理A2780细胞,MTT法检测细胞活力。2.分别用不同浓度的Epoxycytochalasin H处理A2780细胞,克隆形成试验观察细胞增殖情况。3.用浓度为40μg/m L的Epoxycytochalasin H处理A2780细胞,Hoechst 33342对细胞核染色,观察细胞核形态。4.分别用不同浓度的Epoxycytochalasin H处理A2780细胞,流式细胞术检测细胞凋亡情况。5.分别用不同浓度的Epoxycytochalasin H处理A2780细胞,Mitosox染色检测线粒体ROS水平。6.分别用不同浓度的Epoxycytochalasin H处理A2780细胞,流式细胞术检测线粒体膜电势。7.Western blot检测凋亡相关蛋白、自噬/线粒体自噬相关蛋白、内质网应激相关蛋白的表达情况。结果:1.MTT试验结果显示,Epoxycytochalasin H降低了A2780细胞的活力,且呈剂量依赖性,IC50=51μg/m L。克隆形成实验结果显示,Epoxycytochalasin H降低了A2780细胞的集落数量,且呈剂量依赖性,说明Epoxycytochalasin H能抑制A2780细胞的增殖。2.Epoxycytochalasin H诱导人卵巢癌A2780细胞凋亡。用Hoechst33342对各组细胞的细胞核进行染色,Epoxycytochalasin H处理后,染色质皱缩明显。流式细胞术检测细胞凋亡情况,发现用Epoxycytochalasin H处理A2780细胞后,细胞的凋亡率增加,且呈剂量依赖性。Western Blot检测凋亡相关蛋白表达情况,发现Epoxycytochalasin H处理后的A2780细胞中Cleaved Caspase-3的表达增加。3.Epoxycytochalasin H能导致A2780细胞的线粒体功能障碍,并诱导线粒体凋亡。通过检测细胞Mito ROS水平,发现Epoxycytochalasin H促使人卵巢癌A2780细胞ROS水平上升。通过流式细胞仪,用JC-1荧光探针检测线粒体膜电势,发现Epoxycytochalasin H处理的A2780细胞JC-1单体形态增加,聚集形态减少,线粒体膜电势呈剂量依赖性降低。Western Blot检测线粒体凋亡相关蛋白发现,Epoxycytochalasin H处理A2780细胞后,细胞中Bax/Bcl-2的比值增加。4.Epoxycytochalasin H可以激活A2780细胞的自噬,增加其自噬通量。Western Blot检测p62、LC3蛋白的表达,发现Epoxycytochalasin H处理A2780细胞后,p62和LC3II/LC3-I的比值逐渐增加。CQ联合Epoxycytochalasin H处理细胞,LC3-II/LC3-I显著升高。5.Epoxycytochalasin H可以激活A2780细胞的线粒体自噬。Western Blot检测线粒体自噬相关蛋白表达,发现Epoxycytochalasin H处理A2780细胞后,Pink和Parkin的蛋白表达增加。6.过表达Parkin可促进Epoxycytochalasin H诱导的细胞凋亡。Western blot检测过表达Parkin的细胞中凋亡相关蛋白发现,抗凋亡蛋白Bcl-2的表达降低,Bax/Bcl-2的比值升高。7.Epoxycytochalasin H激活人卵巢癌A2780细胞内质网应激。Western Blot检测Grp78和Cleaved Caspase-4表达情况发现,Epoxycytochalasin H诱导Grp78蛋白的表达呈时间依赖性增加,Cleaved Caspase-4表达增加。结论:1.Epoxycytochalasin H激活PINK1/Parkin介导的线粒体自噬,造成人卵巢癌A2780细胞线粒体功能紊乱,并增强Epoxycytochalasin H诱导的人卵巢癌A2780细胞的凋亡。2.Epoxycytochalasin H引起内质网应激,进一步诱导人卵巢癌A2780细胞的凋亡。