透析进样毛细管电泳研究

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毛细管电泳在分析复杂体系(如环境体系、生物体系)中小分子时,颗粒物和生物大分子常会带来各种各样的麻烦,必须对样品进行烦琐的预处理。但目前的预处理技术多是离线方式,不仅过程复杂,还会引起严重的样品损失,给毛细管电泳在生命体系分析中的应用带来不便。因此,发展可在线(或在柱)滤除大分子和颗粒物干扰、简便易行的毛细管电泳方法,对进一步扩展毛细管电泳的应用有重要意义。本论文在分离毛细管进样端口原位制备透析膜,建立了一种在柱透析进样毛细管电泳方法。该方法可对复杂样品直接进样,有效避免基质中大分子和颗粒物干扰;采样量小,具有微透析特点。本研究详细考察了该方法的性能,并进行了其应用研究。主要研究内容如下: 1) 建立了透析进样毛细管电泳方法并考察了系统性能。在分离毛细管进样端端口采用相转化法原位制备了聚砜膜。直接用该毛细管对复杂样品中小分子采样,实现了透析与毛细管电泳在柱联用分析。膜在毛细管端口原位生成,与毛细管结合紧密,死体积小,能有效拦截大分子和颗粒物,pH 耐受范围宽,稳定性好,能连续使用12 h 以上。电泳重现性好,柱效损失小。既可以电迁移进样,也可以采用平衡透析进样。2) 对系统性能进行了优化。膜的截割分子量(样品净化能力)可以通过控制成膜液配方控制,提高了本方法的灵活性;进行了透析进样毛细管电泳电化学检测研究,提高了检测灵敏度,扩大了本方法的使用范围。3) 将本方法应用于咖啡牛奶中游离咖啡因的直接分析。咖啡牛奶没有经过任何预处理直接进样,测定步骤简单,蛋白等物质干扰小。测得其中游离咖啡因浓度为0.68 mmol·L-1。4) 采用本方法研究了药物与蛋白的相互作用。通过测定与大分子作用后的小分子的游离浓度,可以求解它们之间的结合常数。测得盐酸异丙嗪与牛血清白蛋白的结合常数为:1.47×104 L·mol-1。与常规毛细管电泳相互作用分析方法相比,本方法中不存在大分子的干扰,在小分子与大分子相互作用分析中有广泛的应用前景。5) 将本方法应用于内源性小分子的测定,测定了血糖浓度。采用柱端安培检测,以自制铜微电极为工作电极,通过优化电泳条件和检测条件,能较好的测定
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