目的:研究失笑散对二氯化钴诱导的缺氧人脐静脉内皮细胞的作用机制,为冠心病心绞痛血瘀证的临床应用提供科学依据。方法:1.培养正常人脐静脉内皮细胞(HUVECs),成功后进行细胞传代,将细胞冻存后置于-80℃冰箱备用,选取3-6代细胞进行实验。2.根据文献总结设计不同浓度二氯化钴进行细胞造模实验,并使用倒置显微镜观察细胞形态,以此选取合适的造模浓度及造模时间。3.将实验分为空白组和失笑散不同剂量组,细胞种板后分组给药培养细胞,使用细胞检测试剂盒-8(CCK-8)法测各组OD值,探究失笑散对正常HUVECs的毒性作用。4.将实验分为空白组、模型组和失笑散不同剂量组,细胞种板后首先造模24h,再分组给药培养细胞,使用CCK-8法测各组OD值,检测失笑散对二氯化钴(CoCl2)诱导的缺氧HUVECs的增殖作用,探究其药效活性。5.使用蛋白免疫印迹法(Western blot)测缺氧HUVECs中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、环氧化酶-2(COX-2)及内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)相关蛋白的表达,研究其发挥活性的作用机制。结果:1.当以200μM为CoCl2造模浓度,造模时间为24小时,CCK-8检测细胞抑制率为25%左右,在此条件下细胞损伤适中,因而选取200μM、24h为二氯化钴造模HUVECs的浓度和时间。2.CCK-8实验显示失笑散不同剂量组细胞存活率与空白组相比无明显差异(P>0.05),表明失笑散对正常HUVECs无毒性作用。3.实验结果显示,模型组与空白组相比,细胞增殖率明显降低(P<0.05),给药后失笑散不同剂量组增殖率较模型组均升高(P<0.05),其中失笑散高剂量组增殖率较模型组具有显著性差异(P<0.05)),表明失笑散对缺氧HUVECs有增殖作用。4.Western blot结果表明,与空白组相比,模型组中HIF-1α及COX-2表达明显升高(P<0.05),eNOS表达明显下降(P<0.05);与模型组相比,给药组细胞中HIF-1α表达随着失笑散浓度的增加而明显下降(P<0.05),而失笑散中高剂量组降低了缺氧HUVECs中COX-2的表达(P<0.05),增加了 eNOS在缺氧细胞中的表达(P<0.05)。结论:失笑散发挥化瘀止痛的作用机制可能与抑制HIF-1α、COX-2的蛋白表达水平,促进eNOS表达有关。