目的：探讨肿瘤组织中T-STAR蛋白表达与hTERT蛋白表达和端粒酶活性表达的相关关系，以及正、反义T-STAR基因真核表达载体转染对不同体外培养的肿瘤细胞的生物学特性、T-STAR表达、hTERT蛋白和端粒酶活性的影响及其可能机制，为进一步深入研究端粒酶活性调控提供线索。 方法：1．收集肺癌、胃癌、肝癌、结肠癌、直肠癌组织标本共46例，以及每一癌组织标本中相应正常组织共46例。分别用免疫组化染色法、western blot定量检测法、RT-PCR半定量检测法对所有组织中T-STAR的表达进行检测，同时用上述各种方法对癌组织中hTERT的表达进行检测，用PCR-ELISA法对癌组织的端粒酶活性进行检测，统计学分析T-STAR表达与hTERT表达和端粒酶活性的相关关系。2．应用分子生物学技术，构建反义T-STAR基因真核表达载体pneo-STAR；用脂质体介导转染法将正、反义T-STAR基因真核表达载体(pEGFP-c1／T-STAR和pneo-STAR)，两种空质粒载体(pEGFP-cl，pcl-neo)分别转入体外培养的肺腺癌细胞株A549，胃癌细胞株SGC-7901，肝癌细胞HepG-2和结肠癌细胞株HCT-116细胞中，用G418筛选阳性转染细胞克隆后，对转染前后各株细胞的生物学特性、生长曲线进行观察，用免疫组化染色法、western blot定量检测法、RT-PCR半定量检测法以及PCR-ELISA法对各细胞株的T-STAR表达、hTERT表达、端粒酶活性进行定性、定量检测，统计学分析以上各检测指标的相关关系。 结果：1．T-STAR蛋白广泛表达于肺、胃、肝、结肠、直肠等组织中，但在这些部位的肿瘤组织中表达较之在正常组织中表达明显升高。 2．在T-STAR阳性表达的组织中，T-STAR主要表达于腺体细胞，既表达于胞浆，也表达于胞核，但以胞浆表达占多数。 3．成功构建了T-STAR反义基因真核表达载体pneo-STAR。 4．将正、反义T-STAR基因真核表达载体成功转染入肺腺癌细胞株A549，胃癌细胞株SGC7-901，肝癌细胞HepG-2和结肠癌细胞株HCT-116细胞等4种体外培养肿瘤细胞中，且有效表达，使正义基因转染细胞中T-STAR蛋白表达水平平均升高121.63％，使反义基因转染细胞中T-STAR蛋白表达水平平均降低78.06％。第三军医大学硕士学位论文 5.经G418筛选获得的阳性克隆中，稳定转染正义T一STAR基因真核表达载体的各株细胞均出现转化表型下降，如生长速度变慢，细胞克隆数减少，核浆比增加等表现，以及胞质突起增多;而稳定转染T一SrTAR反义基因真核表达载体的各株细胞均出现转化表型增加，如生长速度变快，细胞克隆数增加，核浆比减少等。 6.对肿瘤组织和体外培养细胞的研究表明:hTERT表达与端粒酶活性大多数情况下具有一致性。 7.T一STAR表达与hTERT表达和端粒酶活性变化呈同向变化趋势，T一STAR表达升高时hTERT表达和端粒酶活性增加，反之减少。 结论:1.T一51’AR广泛表达于肺、胃、肝、结肠及直肠等部位的正常组织和肿瘤组织的腺体细胞中，但在肿瘤组织中的表达较之在正常组织中表达明显升高。 2.成功构建了反义T一sTAR基因真核表达载体pneo一sTAR。将正、反义T一STAR基因真核表达载体成功转染入不同体外培养肿瘤细胞中，并有效表达，使T一STAR蛋白表达水平出现特异性升高或降低。 3.T一STAR参与了肿瘤细胞的胞内信号传导过程;T一STAR可使细胞转化表型下降，对细胞生长、克隆形成起抑制作用。 4.T一STAR对hTERT表达和端粒酶活性起正调控作用。T一STAR可能通过对hTERT蛋白的可逆性磷酸化调控和hTERT per一mRNA的选择性剪接两方面对端粒酶活性产生影响。