紫穗槐苷E对癌周肝硬化肝细胞增殖的影响及机制研究

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【目的】  探讨天然产物紫穗槐苷E对癌周肝硬化肝细胞QSG-7701增殖的影响及其作用机制。  【方法】  1.体外培养癌周肝硬化肝细胞QSG-7701;  2.不同终浓度(0.03, 0.1, 0.3μM)的紫穗槐苷E处理QSG-7701细胞,通过MTT法检测细胞增殖的情况;  3.不同终浓度(0.03, 0.1, 0.3μM)的紫穗槐苷E处理QSG-7701细胞,通过Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡的情况;  4.不同终浓度(0.03, 0.1, 0.3μM)的紫穗槐苷E处理QSG-7701细胞,通过Western blotting法检测凋亡相关蛋白、细胞周期相关蛋白、肝纤维化相关蛋白以及PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白的表达情况。  【结果】  1.紫穗槐苷E对癌周肝硬化肝细胞QSG-7701增殖的影响:MTT法结果显示,不同终浓度(0.03, 0.1, 0.3μM)的紫穗槐苷E作用24、48、72 h时,其IC50值分别为7.6±1.5、5.7±1.2和3.2±0.6 μM,与对照组相比,紫穗槐苷E明显抑制 QSG-7701 细胞的增殖,且与剂量和时间呈线性关系,差异有统计学意义(P<0.05)。  2.紫穗槐苷 E 对癌周肝硬化肝细胞 QSG-7701 凋亡的影响:通过 Annexin V-FITC/PI 双染法检测,结果显示,与对照组相比,随着紫穗槐苷 E 浓度的增加,癌周肝硬化肝细胞QSG-7701凋亡率明显上升,且呈明显浓度依赖性,差异有统计学意义(P<0.05);通过 Western blotting 法检测发现,与对照组相比,随着紫穗槐苷E的浓度提高,促凋亡蛋白Bax表达水平升高,而抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-XL的表达水平下降,c-Myc、凋亡抑制因子survivin蛋白的表达也明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。  3.紫穗槐苷E对癌周肝硬化肝细胞QSG-7701细胞周期的影响:通过Western blotting法检测,结果发现,与对照组相比,随着紫穗槐苷E浓度的增加,细胞周期相关蛋白CyclinB1、p-Wee1表达明显下调,呈明显浓度依赖性,差异有统计学意义(P<0.05)。  4.紫穗槐苷E对癌周肝硬化肝细胞QSG-7701肝纤维化的影响:通过Western blotting法检测,结果发现,与对照组相比,随着紫穗槐苷E浓度的增加,YAP1蛋白的表达出现明显的下降,且呈明显浓度依赖性,差异有统计学意义(P<0.05)。  5.紫穗槐苷 E 对 PI3K/AKT/mTOR 信号通路相关蛋白的影响:Western blotting结果发现,不同终浓度(0.03, 0.1, 0.3μM)的紫穗槐苷E作用QSG-7701细胞24 h后,PI3K/AKT/mTOR信号通路的相关蛋白p-mTOR、p-AKT、p-PI3K表达下降,且mTOR的下游底物P70S6K也明显下降,而mTOR、总AKT、总PI3K蛋白的表达水平无明显影响。  【结论】  1. 紫穗槐苷E对癌周肝硬化肝细胞QSG-7701的增殖具有抑制作用,且与剂量和时间呈线性关系。  2. 紫穗槐苷E可能通过下调PI3K/AKT/mTOR信号通路来抑制癌周肝硬化肝细胞QSG-7701的增殖。  3.紫穗槐苷E可能通过上调Bax,同时下调Bcl-2、Bcl-xl、c-Myc以及survivin的表达来诱导癌周肝硬化肝细胞QSG-7701的凋亡。  4.紫穗槐苷E可能通过下调CyclinB1、p-Wee1的表达使癌周肝硬化肝细胞QSG-7701停滞于G2/M期。  5.紫穗槐苷E可能通过下调YAP1的表达抑制肝纤维化。
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