2种减肥药物的联合分析及芬氟拉明在中毒大鼠体内的分布研究

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目的1.研究建立生物检材中盐酸芬氟拉明和盐酸西布曲明的联合分析测定方法。2.建立大鼠灌胃芬氟拉明急性中毒模型,研究芬氟拉明在体内分布规律。3.通过其分布规律及特点,为相关案件的法医鉴定工作提供实践依据;同时也为保健食品中是否违法添加芬氟拉明提供简便、可靠的分析方法。方法1.分析方法的建立待测生物样品碱化后,以乙酸乙酯液-液萃取,气相色谱法(GC)进行检测。色谱条件:TR-5MS毛细管柱;柱温:三阶段程序升温,初始温度为80℃,持续2min,以13℃/min升温至190℃,再以5℃/min升至210℃,最后以13℃/min升至270℃,继续1min;FID检测器;进样口、检测器温度均为280℃;不分流/分流进样,分流比为20:1,进样后0.2min分流;进样量1μL。2.定性、定量分析利用芬氟拉明及西布曲明标准品的保留时间(tr值)定性。配制混合药物的标准工作溶液系列,用气相色谱法进行分析,分别以混合标准样品浓度、相关峰面积为横坐标和纵坐标,计算其线性回归方程,用于检材中芬氟拉明和西布曲明浓度的定量分析。3.分布研究雄性SD大鼠随机分为每组六只的实验组与对照组。实验组大鼠灌胃芬氟拉明的剂量为两倍大鼠LD50(LD50为122mg/kg);对照组大鼠灌胃等量生理盐水。灌胃30min后处死实验组大鼠,取心血、尿液、脑、心、肺、肝、脾、肾与肌肉检材,分别检测芬氟拉明含量。对照组大鼠的样品作为空白对照。经过相关数据处理后得出芬氟拉明在大鼠体内的分布规律。结果1.检测结果在所建立的气相色谱分析方法中,芬氟拉明和西布曲明完全分离,出峰良好,保留时间分别为5.8min和12.8min,内源性物质对检测无干扰。血、尿、肝中芬氟拉明和西布曲明定量检测的线性范围均为1.0-150.0μg/mL(或μg/g),线性关系良好。最低检测限为0.2μg/mL(S/N≥3)。回收率数据均在95.8%-105.0%之间,日内、日间相对标准偏差都小于5.5%。2.中毒表现灌胃给药后实验组大鼠出现精神躁动,随着时间延长肌肉震颤,易受外界声音刺激,呼吸频率加快,30min后未死亡。对照组未见明显异常。3.药物分布情况急性中毒大鼠的体液和各脏器中芬氟拉明的分布排序为:肺>肝>脾>肾>脑>尿液>心>肌肉>血液。结论1.本实验建立的气相色谱分析方法可以同时测定芬氟拉明和西布曲明。该方法样品处理简便,检测快速、准确、可靠,适用于法医毒物分析及保健品检测。2.芬氟拉明体内分布结果表明:芬氟拉明在肺、肝、脾、肾等脏器组织中含量较高,血液含量较低。这主要和药物的高脂溶性有关。3.本实验结果提示:对疑为口服芬氟拉明中毒的案件,除血液外,肺脏、肝脏、肾脏、尿液都有一定量的分布,均适合作为检材使用。本实验建立的分析方法及分布研究对今后的法医鉴定工作提供了实践依据。
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