目的：CpG位点的异常甲基化是肿瘤早期而且是常见的基因改变。异硫氰酸苯已酯是一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂,拟研究异硫氰酸苯已酯对白血病细胞P16基因是否有去甲基化的作用。本试验采用甲基化特异性微阵列法定量检测急性白血病P16基因的甲基化改变。初步探讨异硫氰酸苯已酯在白血病细胞中去甲基化的作用。 方法：用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,并以此为模板进行PCR扩增。目的序列中未甲基化的CpG位点被翻转成TpG,而甲基化的CpG位点保持不变。设计1组特殊荧光标记探针构建一种检测P16基因启动子区3个CpG位点甲基化改变的芯片,探针包括一对非甲基化探针和甲基化探针,检测相邻的3个CpG位点甲基化的程度。本试验采用基因芯片的方法,将完全未甲基化的DNA和完全甲基化的DNA混合后制成标准曲线,将待测细胞株DNA及病人样本DNA点在芯片上与标准曲线进行比较后得出定量检测的结果。 结果：探针对应的荧光强度标准曲线图,R2=0.9660,呈很好的线性关系,可以用来消除背景“噪音”,定量检测样本。用基因芯片成功的定量检测了用OμM、5μM、10u M异硫氰酸苯已酯孵育U266细胞72小时后U266细胞株的甲基化程度,分别为78.2％,61.7％,54.8％。定量检测了30例急性白血病样本P16基因的甲基化改变。30例白血病患者中有11例(36.7％,11/30)出现了不同程度的P16基因高甲基化,在加入5μM异硫氰酸苯已酯孵育72小时后,有7例患者出现了不同程度的P16基因甲基化程度下降(-例由84.3％下降为64.8％；一例由47.5％下降为25.4％；一例由32.4％下降为27.3％；一例由39.8％下降为21.7％；一例由16.4％下降为11.9％；一例由24.6％下降为20.7％；-例由59.5％下降为46.3％),1例患者出现了甲基化程度的增加(由16.2％上升为17.5％),3例患者甲基化程度基本保持不变。 结论：PHI 可以降低U266细胞株甲基化程度,同时可以降低体外培养的白血病患者细胞的甲基化程度。