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近几年,全球胰腺病的发病率和致死率渐增,在欧美,胰腺癌已经是排名第四、五位的高致死率的恶性肿瘤。此课题主要针对其高转移及易伴发糖尿病的特点进行相关机制的研究。第一部分:胰腺癌高转移相关因子Six1的表达研究目的:从前期双向电泳结果中的筛选出的候选肿瘤标记物中进一步筛选出与肿瘤转移相关的蛋白。找到其上游调控分子,并进行进一步研究,分析其表达与胰腺癌的关系及其临床生物学意义。方法:采用免疫组织化学的方法对候选肿瘤标记物进行筛选,并用组织芯片及免疫印迹技术进行验证。进而采用免疫印迹及免疫组织化学技术,检测其上游调控蛋白在4株胰腺癌细胞系及3T3细胞系的表达和其在胰腺癌、良性腺瘤、胰腺炎及癌旁组织中的表达。结果:免疫组化结果显示,与肿瘤转移相关的Ezrin蛋白在胰腺癌细胞及组织中表达显著上调(P<0.05)。免疫印迹结果显示,Ezrin的调控蛋白Six1在Bxpc-3和CFPAC-1细胞株中的表达明显增强;并且在胰腺癌组织和良性腺瘤组织的表达也显著高于癌旁组织。免疫组化结果显示,34例(85.0%)胰腺癌组织、3例(75.0%)良性腺瘤组织、6例(60.0%)胰腺炎和癌旁组织中Six1表达阳性;其阳性表达与肿瘤大小和远处转移显著相关(P<0.05)。结论:Ezrin与胰腺癌肿瘤转移高度相关。上游调控蛋白Six1表达是胰腺癌发生的早期事件,可能导致肿瘤向恶性发展;其表达水平与肿瘤大小及远处转移有关。第二部分:胰腺癌易伴发糖尿病相关机制的蛋白质组学研究目的:发现可能的胰腺癌-糖尿病相关因子,并对发现的蛋白进行进一步验证与初步的分子生物学研究。方法:采用人胰腺肿瘤细胞PANC-1的条件培养基(CM)刺激大鼠胰岛β细胞INS-1来模拟体内状态,通过差异荧光双向电泳的方法分析了INS-1胰岛β细胞在对CM刺激前后蛋白表达谱的变化。并对候选蛋白进行免疫印迹及免疫组化验证。结果:发现并验证了5个与胰腺癌细胞刺激有关的蛋白,HSP60, Peripherin和Prp19都在CM刺激后表达上调,前两者是先前就报道过的与?型糖尿病相关的蛋白,而后者则是与DNA修复有关的蛋白;与此同时,HMOX1和GRP78这两个蛋白表达下调。免疫组化结果显示,与肿瘤邻近的胰岛与正常胰腺的胰岛相比,Peripherin的表达显著增强。结论:我们发现并验证的这5个蛋白从分子功能上都与胰腺癌和糖尿病相关,这些与肿瘤诱导有关的蛋白也许可以为临床上监视早期胰腺癌病人发生糖尿病提供很好的线索。