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研究背景：研究表明,刚开始出现废用性肌肉萎缩时,蛋白质合成代谢减弱起到了主要的作用,然而随着废用性肌肉萎缩时间的延长,则主要是蛋白质降解代谢的增强占据主导地位。废用性肌萎缩的发生归因于蛋白合成的抑制和蛋白降解的增加,其中以蛋白降解为主(Suzuki 2004).目前,国内外学者普遍认为这两种E3泛素蛋白连接酶因子MAFbx (Muscle Atrophy F-box)、MuRF 1 (Muscle Ring Finger 1)是骨骼肌蛋白质降解的关键因子。在蛋白质合成代谢方面,Myf-5 (Myogenic Regulator Factors-5)成肌调节因子是维持骨骼肌细胞生长发育的重要因子,与肌细胞合成与增殖相关。这次的实验研究就是要通过测量冬眠的不同时期(冬眠前、冬眠中、阵间激醒和出眠)达乌尔黄鼠(Spermophilus dauricus)的慢肌比目鱼肌和快肌趾长伸肌MAFbx、MuRF1与Myf-5的变化,综合考虑各种骨骼肌的蛋白质代谢情况,从蛋白质代谢方面探究达乌尔黄鼠的冬眠期的抗废用性萎缩机制。研究目的：1.通过比较后肢去负荷大鼠与正常大鼠比目鱼肌、趾长伸肌肌萎缩相关因子,即MAFbx的mRNA表达量、MuRFl的mRNA表达量和成肌调节因子Myf-5的mRNA表达量,以此来研究其与蛋白质代谢水平的关系,进一步探讨废用性肌萎缩的发生机制,并分析在蛋白质代谢代谢水平上川芎嗪对抗废用性肌萎缩的机制。2.通过比较冬眠不同时期达乌尔黄鼠比目鱼肌、趾长伸肌肌萎缩相关因子,即MAFbx的mRNA表达量、MuRFl的mRNA表达量和成肌调节因子Myf-5的mRNA表达量,以此来探讨冬眠不同时期达乌尔黄鼠在蛋白质代谢水平上对抗废用性肌萎缩的可能机制。3.通过比较冬眠不同时期达乌尔黄鼠比目鱼肌、趾长伸肌肌萎缩相关因子,即MAFbx蛋白的表达量和成肌调节因子Myf-5的蛋白表达量,以此来探讨冬眠不同时期达乌尔黄鼠在蛋白质代谢水平上对抗废用性肌萎缩的可能机制。研究方法：1.实时荧光定量PCR技术测量比目鱼肌、趾长伸肌MAFbx、MuRFl和Myf-5 mRNA的相对表达量；2. Western Blot法测量比目鱼肌、趾长伸肌MAFbx和Myf-5的蛋白表达量。研究结果：1.大鼠吊尾14d后,比目鱼肌肌萎缩相关因子MAFbx mRNA的表达量显著升高了218%(P<0.01)。大鼠川芎嗪同步灌胃给药(60mg. kg-1),然后发现MAFbx mRNA的表达量与正常组相比显著升高了178%(P<0.01),与后肢去负荷组相比略有降低,但无统计学意义(P>0.05)。大鼠吊尾14d后,比目鱼肌肌萎缩相关因子MuRFl mRNA的表达量显著升高了11倍(P<0.01)。同步给予大鼠川芎嗪治疗后,MuRFl mRNA表达量与正常组相比显著升高了1倍(P<0.01),与后肢去负荷组相比降低了84.4%(P<0.01)。大鼠吊尾14d及同步给药后,比目鱼肌成肌调节因子Myf-5 mRNA表达量均无显著变化(P>0.05)。2.大鼠吊尾14d及同步给药后,趾长伸肌MAFbx mRNA、MuRF1 mRNA和Myf-5mRNA的表达量均无显著变化(P>0.05)。3.与冬眠前组相比,冬眠组黄鼠比目鱼肌肌萎缩相关因子MAFbx mRNA的表达量升高了11倍(P<0.05),阵间激醒组黄鼠比目鱼肌MAFbx mRNA的表达量升高了3倍(P<0.05),出眠组表达量无显著变化(P>0.05)。其他变化均无统计学意义(P>0.05)。与冬眠前组相比,冬眠组黄鼠比目鱼肌肌萎缩相关因子MuRFl mRNA的表达量升高了97.8%(P<0.05),出眠组黄鼠比目鱼肌MuRFl mRNA的表达量升高了1.3倍左右(P<0.05)。其他变化均无统计学意义(P>0.05)。冬眠不同时期达乌尔黄鼠比目鱼肌成肌调节因子Myf-5 mRNA的表达量也均无显著变化(P>0.05)。4.与冬眠前组相比,阵间激醒组黄鼠趾长伸肌mRNA的表达量升高了约8倍(P<0.05),出眠组表达量无显著变化(P>0.05)。同时,阵间激醒组黄鼠趾长伸肌mRNA的表达量比出眠组黄鼠该基因的表达量高了约7.5倍(P<0.05)。其他变化均无统计学意义(P>0.05)。与冬眠组相比,阵间激醒组黄鼠趾长伸肌MuRFl mRNA的表达量下降了63.7%(P<0.05),出眠组表达量无显著变化(P>0.05)。其他变化均无统计学意义(P>0.05)。与出眠组相比,阵间激醒组黄鼠趾长伸肌Myf-5 mRNA的表达量下降了93%(P<0.05)。其他变化均无统计学意义(P>0.05)。5.与冬眠前组相比,冬眠组黄鼠比目鱼肌MAFbx蛋白表达量升高了3倍(P<0.01),阵间激醒黄鼠比目鱼肌MAFbx蛋白表达量升高了1.4倍(P<0.01)。与冬眠组相比,阵间激醒组下降了39.3%(P<0.01),出眠组下降了64.9%(P<0.01)。与阵间激醒组相比,出眠组下降了42.2%(P<0.05)。其他变化均无统计学意义(P>0.05)。冬眠不同时期达乌尔黄鼠比目鱼肌成肌调节因子Myf-5蛋白的表达量均无显著变化(P>0.05)6.与冬眠前组相比,阵间激醒组黄鼠趾长伸肌MAFbx蛋白的表达量升高了约1.15倍(P<0.05)。同时,阵间激醒组黄鼠趾长伸肌MAFbx蛋白的表达量比出眠组黄鼠的表达量高了约1.02倍(P<0.05)。其他变化均无统计学意义(P>0.05)。与冬眠前组相比,阵间激醒组黄鼠趾长伸肌Myf-5蛋白的表达量下降了6.33%(P<0.05)。其他变化均无统计学意义(P>0.05)。研究结论：1.后肢去负荷会使抗重力肌比目鱼肌的蛋白降解代谢增强,但对蛋白合成代谢无影响。川芎嗪可以通过对抗肌萎缩因子MuRFl mRNA表达量的升高起对抗作用,对抗肌肉萎缩。肌合成因子Myf-5没有实质性的变化。2.后肢去负荷对非抗重力肌趾长伸肌的上蛋白代谢没有实质影响。3.在达乌尔黄鼠的冬眠过程中,其比目鱼肌的肌萎缩因子确实发生了升高的变化,使蛋白质的分解代谢增强了,有可能影响出眠后黄鼠比目鱼肌的轻微萎缩。肌合成因子Myf-5没有实质性的变化。4.在达乌尔黄鼠的冬眠过程中,其趾长伸肌的肌萎缩因子均受阵间激醒影响较大,认为阵间激醒是保护黄鼠趾长伸肌几乎不萎缩的方法。阵间激醒使趾长伸肌中的肌合成因子Myf-5有一定影响。5.综合所有结果,阵间激醒是达乌尔黄鼠对抗肌肉萎缩的一种方法。