极端甘露聚糖酶资源研究

来源 :中国科学院研究生院 中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qiyueliuhua
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甘露聚糖酶是一类具有重要工业应用价值的水解半纤维素的酶类,特别是极端微生物来源的甘露聚糖酶,由于能够在特定的苛刻条件下保持稳定并发挥较大的酶活而具有极大的商业应用潜力。本论文旨在发掘性质良好的极端甘露聚糖酶资源。   首先从云南热泉中分离纯化得到了40株嗜热菌,进行了产酶情况的鉴定,发现40株菌中19株可以产生淀粉酶,4株产木聚糖酶、1株产果胶酶、2株产纤维素酶,8株产蛋白酶。没有发现产木质素酶和酯酶的菌株。然后利用透明圈平板法从800多株嗜热菌和嗜碱菌中筛选出了7株嗜热菌和22株嗜碱菌能够产甘露聚糖酶,对其粗酶液的性质做了全面的测定。其中HMTS15所产的甘露聚糖酶最适反应pH10;最适反应温度75℃;温度稳定性和pH稳定性较其他菌株也更为优秀,有进一步研究的价值。通过形态特征观察、生理生化测定、16S rRNA序列分析等实验确定菌株HMTS15的分类地位。鉴定结果显示HMTS15是与Bacillus agaradhaerens DSM8721不同的新菌株。通过硫铵沉淀、阴离子交换柱DEAE-sepharose层析分离和两次Superdex20010/300 GL柱分子筛层析分离得到了电泳纯的酶。测定了纯酶的各项性质,该酶最适反应pH和温度分别为10和75℃;65℃保温1h残余酶活仍超过50%;在pH6.5-pH11中都有较好的稳定性,当NaCl浓度为15%时仍有50%以上的残余酶活,对SDS不敏感。其在高温高碱的条件下表现出的高酶活以及优秀的pH稳定性和耐盐性在工业应用上有一定的潜力。  
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