【摘 要】
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目的观察miRNA-1、miRNA-133在大鼠高位脊髓损伤（SCI）早期心肌中的变化,初步探讨miRNA-1、miRNA-133在高位脊髓损伤后早期心肌细胞凋亡中扮演的角色并研究它是否是高位脊髓损伤后大鼠心肌损伤或者保护的机制之一。方法1.清洁级健康雄性SD大鼠,8-10周龄,体重250-300 g,共42只,随机分为7组（每组n=6）:空白组（CK组）、假手术组（Sham组）、高位SCI后4
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目的观察miRNA-1、miRNA-133在大鼠高位脊髓损伤（SCI）早期心肌中的变化,初步探讨miRNA-1、miRNA-133在高位脊髓损伤后早期心肌细胞凋亡中扮演的角色并研究它是否是高位脊髓损伤后大鼠心肌损伤或者保护的机制之一。方法1.清洁级健康雄性SD大鼠,8-10周龄,体重250-300 g,共42只,随机分为7组（每组n=6）:空白组（CK组）、假手术组（Sham组）、高位SCI后4 h组（SCI 1组）、高位SCI后12 h组（SCI 2组）、高位SCI后24 h组（SCI 3组）、高位SCI后36 h组（SCI 4组）以及SCI后48 h组（SCI 5组）;2.采用改良的Allens打击法,建立高位SCI大鼠模型,Sham组仅暴露脊髓,术后观察大鼠的表现并记录,用Basso-Beattie-Bresnahan（BBB）评分法评估大鼠运动功能,标本选取同一部位的心肌组织;3.在透射电镜下观察各组大鼠心肌细胞的超微结构;4.TUNEL法检测各组大鼠心肌细胞的凋亡情况;5.RT-PCR技术测定各组大鼠心肌组织miRNA-1、miRNA-133表达的变化;6.Western-blot法测定各组大鼠心肌组织HSP 60、Bcl-2、Bax和Caspase-9的含量变化。结果1.Sham组大鼠术后四肢活动功能正常,与术前相比未见明显变化,BBB评分均为21分,与CK组相比无明显差异（P>0.05）。SCI各组术中打击处变灰暗,术后活动和进食显著减少,双下肢呈弛缓性瘫痪,且BBB评分均趋近于0,与Sham组相比,差异显著（P<0.05）。2.透射电镜结果:与CK组大鼠比较,Sham组心肌结构未见明显改变,两组未见明显差异;SCI各组心肌细胞结构出现不同程度的改变,包括肌原纤维溶解、肌节断裂、肌浆网扩张、溶酶体增多以及细胞器结构破坏,细胞肿胀乃至破裂等。3.TUNEL法检测结果:Sham组大鼠心肌细胞凋亡率与CK组大鼠相比无明显差异（P>0.05）;与Sham组相比,SCI 3组、SCI 4组、SCI 5组心肌细胞凋亡率均升高,差异显著（P<0.05）。4.PCR检测结果:Sham组心肌组织中miRNA-1、miRNA-133表达量与CK组相比无明显差异（P>0.05）。与Sham组相比,SCI 2组、SCI 5组miRNA-1相对表达量升高;SCI 1组、SCI 2组、SCI 3组miRNA-133相对表达量升高,差异显著（P<0.05）。5.Western blot检测结果:Sham组心肌组织中HSP60、Bcl-2、Bax以及Caspase-9表达量与CK组比较无明显差异（P>0.05）。与Sham组相比,SCI 1组、SCI 2组、SCI 3组、SCI 4组心肌组织中HSP60表达量降低,SCI 1组、SCI 2组、SCI 3组心肌组织中Bcl-2表达量降低,而SCI 1组、SCI 2组、SCI 3组心肌组织中Bax表达量及Caspase-9表达量均升高,差异显著（P<0.05）。结论1.大鼠高位脊髓损伤后早期即存在心肌损伤,表现为细胞超微结构改变,与细胞凋亡密切相关。2.大鼠高位脊髓损伤后早期心肌组织中miRNA-1、miRNA-133表达增加,miRNA-1可能作用于HSP60,促进Bcl-2减少以及Bax增加,进而促进细胞凋亡,这可能是导致高位脊髓损伤后大鼠心肌损伤机制,而miRNA-133表达增加则可能是高位脊髓损伤后早期心肌代偿保护机制。
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