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一、研究背景胃癌是常见的消化系统恶性肿瘤,70%以上的病例发生在发展中国家,其中一半以上发生在中国。目前,胃癌的治疗仍以手术切除为主,但单纯手术疗效甚差,术后五年生存率也只有20%~30%。抗癌药物作为胃癌手术后的辅助治疗,可提高手术治疗效果,降低复发率。由于现有的化疗药物大多选择性不强,在抑制或杀伤肿瘤细胞的同时,对正常细胞,尤其是增殖旺盛的细胞(如骨髓、头发毛囊)也有抑制杀伤作用,化疗药物在一般治疗剂量时就可使机体产生不良反应。因此,化疗药物的毒副作用是目前肿瘤化疗中的主要问题。近年来,天然植物提取活性药物因其具有毒副作用小且作用靶点广泛的优势而引起人们的高度关注。白藜芦醇(resveratrol,RES)是一种天然的多酚类化合物。二十世纪四十年代白藜芦醇首次被分离出来,有顺式和反式异构两种形式。它主要存在于葡萄、花生和浆果等植物中,能够帮助植物抵抗微生物和真菌感染。二十世纪八十年代,世界卫生组织调查发现法国人习惯饮用红葡萄酒与其心血管疾病的发病率和死亡率普遍较低相关,而红葡萄酒中的白藜芦醇则是“法国悖论”现象背后潜在的原因。此后更多的研究发现白藜芦醇除了具有心脏保护作用外还具有抗氧化、抗炎以及抗癌等作用。目前关于白藜芦醇抗肿瘤的机理不详,已有研究证实白藜芦醇的抗癌活性与诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞密切相关[1,2],但背后的分子机制尚不明确。二、目的本课题以体外培养胃癌SGC-7901细胞为研究对象,研究白藜芦醇对SGC-7901细胞的生长活性、增殖、周期和凋亡的影响,为白藜芦醇的抗肿瘤活性以及白藜芦醇的临床应用提供理论与实验依据。三、方法1.MTT法检测不同剂量以及不同作用时间下白藜芦醇对体外培养人胃癌SGC-7901细胞生长活性的影响。2.克隆形成实验观察白藜芦醇对胃癌SGC-7901细胞增殖能力的影响。3.AO/EB荧光染色观测白藜芦醇对胃癌SGC-7901细胞形态及诱导凋亡的影响。4.流式细胞技术分析白藜芦醇对人胃癌SGC-7901细胞凋亡和周期的影响。5.Western Bloting法检测白藜芦醇对人胃癌SGC-7901细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的影响以及对caspase-3、caspase-8以及NF-κB蛋白激活的影响。四、结果1.MTT结果显示与对照组相比白藜芦醇对SGC-7901细胞的细胞活性有显著抑制作用。200μmol/L的白藜芦醇作用24小时后,细胞活性抑制率即可达到约50%。(*P<0.05)。2.克隆形成实验结果显示白藜芦醇作用后SGC-7901细胞克隆形成数目及克隆大小均被抑制,此效果与浓度呈正比关系。3.AO/EB荧光染色及凋亡流式结果显示经白藜芦醇作用后SGC-7901细胞凋亡增多,各实验组SGC-7901细胞的凋亡率都显著高于对照组(*P<0.05)。4.流式周期分析结果经Mod Fit LT 5.0软件分析显示,白藜芦醇可显著引起SGC-7901细胞周期紊乱。与对照组相比,白藜芦醇可引起SGC-7901细胞在S期的阻滞(*P<0.05)。5.Western Bloting法检测结果显示白藜芦醇可以抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达而促进促凋亡蛋白Bax的表达。相较于pro-caspase-3和procaspase-8表达减少,cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-8表达则增多,说明caspase-3和caspase-8的激活增多。而细胞核中磷酸化NF-κB以及胞质中的NF-κB表达皆下调。五、结论1.白藜芦醇在体外实验中能显著抑制胃癌SGC-7901细胞的细胞活性,且抑制作用呈浓度和时间依赖关系。2.白藜芦醇可抑制胃癌SGC-7901细胞的的增殖克隆。3.白藜芦醇可诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡。4.白藜芦醇阻滞胃癌SGC-7901细胞在S期。5.白藜芦醇可抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达和NF-κB的激活,促进促凋亡蛋白BAX的表达和caspase-3/8的激活,从而促进白藜芦醇诱导的凋亡发生。