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寡肽类化合物因为具有较强的生物活性,可作为药物或者药物前体,而引起了人们的关注。本文利用电喷雾质谱检测手段,研究了L-亮氨酸在三氯氧磷辅助下的自组装成肽反应,结果表明:随着溶剂极性的增大,成肽肽链长度增长;随着反应温度的升高,反应速率加快,肽链长度增长,且伴有环肽(直链肽脱水)的生成;随着时间的延长,肽链长度增长。根据以上反应规律,摸索出了合成亮氨酸寡肽库的合适条件:投料比1:1,50℃温度下于二氧六环中反应3h,可得到亮氨酸二肽、三肽及少量四肽。
利用ESI-MS研究了亮氨酸寡肽的正离子多级质谱裂解规律:亮氨酸寡肽比较容易碎裂,先失去一分子水,再失去一分子一氧化碳或者亮氨酸残基,或者直接失去一分子亮氨酸,这是多肽b型断裂的典型特征,这一裂解规律也证实了L-亮氨酸与三氯氧磷反应的产物是长度不同的寡肽。
利用反相RP-HPLC对合成的亮氨酸寡肽库进行了分离,摸索出了合适的分离条件,分离出了亮氨酸二肽和亮氨酸三肽,并利用IR,1HNMR,13CNMR对亮氨酸二肽的结构进行了表征;利用快速色谱(flashchromatography)对寡肽混合物的分离条件进行了研究,探讨了进样量、梯度洗脱等因素对分离的影响,找到了一种合适的分离条件,分离得到了亮氨酸二肽,产率为22﹪。
利用UV-Vis研究了亮氨酸二肽与微量金属离子(Cu2+,Mn2+,Zn+)的配位作用,分别讨论了pH值、温度、时间等因素对配位作用的影响,结果表明:亮氨酸二肽与Cu2+的配位作用最强,反应速率最快,形成的配合物也较稳定,最佳pH值范围是6.0~10.0,配位比是1:1,并推测了亮氨酸二肽-铜配合物的结构;亮氨酸二肽与Mn2+,Zn2+的配位作用接近,反应速率相对较慢,于30℃下反应1h~2h,形成稳定的配合物,最佳pH范围是5.0~9.0,亮氨酸二肽与Mn2+,Zn2+的配位比均为2:1。