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目的:大量实验证明，COX-2在各种原因引起的疼痛过程中发挥重要作用。以往的研究已经证实外周ephrinBs/EphBs信号参与伤害性信息的调制，如激活外周ephrinBs/EphBs信号可引起伤害性感受器敏感化及痛觉过敏。COX-2系统是否参与外周ephrinBs/EphBs信号激活所致的外周敏感化和痛觉过敏尚不清楚。本研究的目的是探讨外周COX-2在ephrinBs/EphBs信号激活所致的痛觉过敏中的作用及其机制。
方法:
1.为观察外周注射ephrinB1-Fc引起皮肤COX-2表达的时间依赖性, 足底注射ephrinB1-Fc（0.5 μg/10 μl），应用Western blot方法检测注射后10分钟、30分钟、1、2、4、8、24、48小时注射部位皮肤COX-2表达。为观察外周注射ephrinB1-Fc是否呈剂量依赖性改变注射部位皮肤COX-2表达，足底注射不同剂量的ephrinB1-Fc（0.02、0.1、0.5 μg/10 μl），观察COX-2表达量变化。
2.为观察非选择性COX抑制剂和选择性COX-2抑制剂对ephrinB1-Fc引起的痛行为表达的影响，在ephrinB1-Fc（0.5 μg/10 μl）注射前30分钟，分别注射不同剂量的非选择性COX抑制剂和选择性COX-2抑制剂，非选择性COX抑制剂ketorolac（0.016，0.08，0.4 μg/10 μl），选择性COX-2抑制剂sc-58125（0.08，0.4，2 μg/10 μl），分别溶于4％的二甲亚砜中，观察ephrinB1-Fc注射后30分钟、1、2、4、8、12、24、48小时热缩足反射潜伏期及机械缩足反射阈值。为观察非选择性COX抑制剂和选择性COX-2抑制剂对ephrinB1-Fc引起的痛行为维持的影响，在注射ephrinB1-Fc （0.5 μg/10 μl）1小时后分别给予非选择性COX抑制剂和选择性COX-2抑制剂，观察注射抑制剂后30分钟、1、2、4、8、12、24、48小时热缩足反射潜伏期及机械缩足反射阈值。
3.为观察抑制外周COX-2对ephrinB1-Fc引起的脊髓背角神经元Fos蛋白表达的影响，在ephrinB1-Fc（0.5 μg/10 μl）注射前30分钟或注射后1小时，分别注射非选择性COX抑制剂或选择性COX-2抑制剂（非选择性COX抑制剂ketorolac，0.4 μg/10 μl，选择性COX-2抑制剂sc-58125，2 μg/10 μl），检测首次给药后1.5小时脊髓背角神经元Fos蛋白表达。
4.为研究外周COX-2是否参与ephrinB1-Fc 引起的外周ERK激活，在注射ephrinB1-Fc（0.5 μg/10 μl）前30分钟皮内给予非选择性COX抑制剂或选择性COX-2抑制剂，采用Western blot方法检测 ephrinB1-Fc 注射后10分钟内注射部位皮肤p-ERK的表达量。
结果:
1．足底注射ephrinB1-Fc可引起注射部位皮肤COX-2呈时间及剂量依赖性表达。
2．预先分别注射非选择性COX抑制剂ketorolac（0.016，0.08，0.4 ug/10 μl），选择性COX-2抑制剂sc-58125（0.08，0.4，2 ug/10 μl），能剂量依赖性阻断ephrinB1-Fc（0.5 μg/10 μl）引起的痛觉异常；皮下注射ephrinB1-Fc（0.5 μg/10 μl）1小时后注射该两种抑制剂，均能逆转ephrinB1-Fc引起的痛行为。
3．预先注射抑制剂或ephrinB1-Fc（0.5 μg/10 μl）注射1小时后注射抑制剂，均能减少ephrinB1-Fc引起的脊髓背角神经元Fos蛋白表达。
4．预先注射非选择性COX抑制剂和选择性COX-2抑制剂均能减少ephrinB1-Fc引起的皮肤p-ERK表达。
结论:COX-2参与外周ephrinBs/EphBs信号激活产生痛觉过敏，其作用机制可能通过ERK通路介导。