目的:构建可持续分泌表达巨噬细胞激活剂Polytuftsin蛋白的重组毕赤酵母菌株,鉴定所获得的Polyttuftsin纯化重组蛋白的生物学活性。方法:合成串联编码40个Tuftsin单体以及6His纯化标签的载体质粒pPIC9K-6His-Polytuftsin;PEG1000化学法将线性化后的载体质粒转化入毕赤酵母菌GS115中,筛选鉴定获得高拷贝阳性转化子;甲醇培养基诱导其分泌表达Polytuftsin蛋白,亲和纯化蛋白粗品后鉴定最终得到的纯化蛋白:体内、外水平上分别检测纯化后的Polytuftsin重组蛋白的生物学功能。结果:1)成功构建了可持续分泌表达Polytuftsin蛋白的重组毕赤酵母菌株,并证实经亲和纯化后得到的Polytuftsin重组蛋白是正确的目的产物,分子量约为20Kda;2)纯化后的Polytuftsin重组蛋白能够提高鼠源巨噬细胞分泌NO、TNF-α因子的能力,较对照组相比,提高比率可达到43%;与此同时,还可提高人源巨噬细胞分泌NO因子能力,较对照组相比,提高比率可达到56%;3)纯化后的Polytuftsin重组蛋白能够提高小鼠腹腔巨噬细胞的杀瘤能力,杀伤率可达到50%;利用Polytuftsin纯化蛋白刺激后的人源巨噬细胞对人胰腺癌细胞系JF305的杀伤活力最大,可达31%;4)体内小鼠L1210白血病模型治疗实验结果发现:较对照组相比,给予Polytuftsin重组蛋白后的小鼠出腹水时间延迟,且小鼠生存期延长,平均达到21天。结论:经毕赤酵母表达系统获得的Polytuftsin重组蛋白,可以有效激活巨噬细胞,是一种新型的巨噬细胞蛋白激活剂。