目的： 从诱导肿瘤细胞分化和凋亡，抑制肿瘤细胞的增殖等方面对异鼠李素的抗肿瘤的作用及机制进行研究；采用现代时间生物学理论及其研究方法探讨肿瘤细胞的基因表达和与增殖有关的酶活性的时间特征，找出异鼠李素药物毒性反应最低、疗效作用最高的时间规律，为异鼠李素在临床上择时治疗提供理论基础。 方法与结果： 1．利用MTT法测定异鼠李素对细胞生长的抑制、光镜下计数绘制细胞生长曲线、光镜和电子显微镜对细胞形态观察、克隆形成和³H-TdR掺入分析，基因组DNA片段分析、流式细胞术等方法研究异鼠李素对HeLa、Tca-8113、YTLMC-90、Eca-109细胞增殖和凋亡的作用。结果显示：异鼠李素能强烈抑制肿瘤细胞的增殖，对细胞生长的抑制作用具有浓度-时间和时间-效应关系；光镜和电镜下观察到异鼠李素导致肿瘤细胞结构改变，核染色质凝集，核啐裂形成凋亡小体，细胞核DNA降解，呈现典型区带特征-Ladder DNA；异鼠李素抑制肿瘤细胞增殖，S和G₂+M期细胞数减少，细胞增殖指数降低，凋亡率增高。 2．为了进一步证实异鼠李素的抑癌抗癌作用，对其抑制肿瘤生长增殖和诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制进行了实验研究。用TRAP-PCR法检测异鼠李素处理后对人癌细胞端粒酶活性的影响；检测过氧化氢酶活性；免疫组化方法测定PCNA表达的变化：流式细胞术方法研究异鼠李素处理肿瘤细胞后对肿瘤相关基因表达的影响；用流式细胞术和免疫荧光法检测异鼠李素处理前后抑制分化因子Id-1表达。结果显示：处理组Hela、Tca-8113、Eca-109细胞株端粒酶活性较对照组差异显著（P＜0.05）；YTLMC-90细胞株端粒酶活性与对照组无明显差异（P＞0.05）：阳性药顺铂对上述几种肿瘤细胞株端粒酶活性无明显降低（P＞0.05）；经异鼠李素和顺铂处理后HeLa、Tca-8113、YTLMC-90、Eca-109细胞PCNA阳性率均低于对照组；过氧化氢酶活性处理组低于对照组；异鼠李素作用后，细胞凋亡率升高，bcl-2、bax、c-myc、H-ras、c-fos、P⁵³基因蛋白的表达改变，bcl-2、c-myc、H-ras表达降低，bax、c-fos和P⁵³表达升高。 3．观察异鼠李素对鼠移植瘤的抑制作用。以鼠Lewis肺癌细胞复制C57BL／6移植瘤模型，鼠随机分组用药，对照组、异鼠李素组、异鼠李素提前灌胃组、顺铂组。用药7天后收集标本，采用光镜、电镜观察，免疫组化分析PCNA、bcl-2、bax的表达。结果：异鼠李素组、提前灌胃组、顺铂组瘤重明显低于对照组（P＜0.05）；免疫组化显示：异鼠李素组、提前灌胃组、顺铂组PCNA表达明显低于对照组，差异有显著性P＜0.01)；bcl-2四川大学博士学位论文表达低于对照组，bax表达高于对照组，差异有显著性（P<0.05）.结论:异鼠李素可抑制鼠Lewis肺癌移植瘤生长，其机制可能与抑制肿瘤PCNA、bc卜2表达，上调bax表达有关。 4.为了探讨人食道癌Eca一1 09细胞DNA合成与c一myc基因表达的近日节律以及异鼠李素对二者的影响作用，达到有效治疗肿瘤的目的，我们用3H一TdR掺入实验和流式细胞仪检测在24小时内不同时间点异鼠李素对Eca一109细胞DNA合成和c一my。基因表达的近日节律的影响，其结果用方差分析和Cosinor法进行统计学分析。结果发现人食道癌Eca一1 09细胞DNA合成和c一myc基因的表达随近日节律变化，且异鼠李素对DNA合成和c一myc基因的表达具有抑制作用，并影响其时间生物学特征。人食道癌Eca一109细胞的生长与c一myc基因表达在20:oo至0:00达到高峰，且异鼠李素在此时间点作用较强，这为制定肿瘤时辰化疗方案提供了有价值的参考。结论: 研究发现，异鼠李素可能主要通过抑制肿瘤细胞DNA合成、端粒酶、过氧化氢酶活性，上调或下调分化和凋亡相关基因表达而抑制肿瘤细胞增殖、生长;诱导癌细胞分化和凋亡抑制肿瘤，为临床化疗提供新的途径。关键词:异鼠李素;增殖;凋亡;肿瘤;癌基因;抑癌基因;时间生物学