星海链霉菌抑菌活性物质的发酵优化和初步分离

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星海链霉菌是本课题组从大连星海海泥样品中分离得到的海洋链霉菌新种,其发酵液具有广谱抗菌活性,对金黄色葡萄球菌、绿脓假单胞菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌等的生长具有抑制作用。本课题研究了发酵液对临床耐药性致病菌的抑制作用,优化了抗菌活性物质的发酵条件,并对抗耐药性金黄色葡萄球菌的物质进行了初步分离纯化。主要实验结果如下:发现发酵产物对临床分离的耐药性鲍曼不动杆菌和两株耐药性金黄色葡萄球菌均有抗性,在培养7 d、营养充足、培养基中不额外添加NaCl时产生的活性物质活性最强。在20℃至100℃范围内30min内热稳定性较好,pH值1到12范围内1 h内酸碱稳定性很好;正己烷、丙酮、乙酸乙酯均不能从发酵液中萃取出活性物质,表明活性物质亲水性强;SPE固相萃取柱实验表明发酵液中含有抗耐药性金黄色葡萄球菌的弱碱性活性物质。采用大孔吸附树脂HP-20吸附等树脂体积的发酵液,未吸附相抗耐药性金黄色葡萄球菌的活性较好且组成较不复杂,该组分用葡聚糖凝胶Sephadex LH 20进一步分离,经HPLC检测表明,纯化后的组分中含若干亲水性很强的物质,在200 nm到400 nm范围内无特征紫外吸收,推测该组分中可能含有氨基糖苷类活性物质。葡聚糖凝胶Sephadex LH 20纯化后的样品经硅胶薄层层析,可被茚三酮显色为紫红色,这与活性物质可能为氨基糖苷类化合物的推测相一致。展层液甲醇:氯仿:氨水比例为5:2:4时,能被茚三酮显色的六种物质分离良好。展层液甲醇:氯仿:氨水比例为3:1:2时,能被茚三酮显色的物质Rf值较大,抑菌活性物质在硅胶板上有移动。对星海链霉菌基因组序列进行初步分析,发现一个类似核糖霉素的基因簇,但TLC分析未发现活性样品中含有与硫酸核糖霉素一致的物质。
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