【摘 要】
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在奶牛乳房炎的防治领域内,植物提取物是最具潜力的抗生素替代品之一。本文通过研究中草药提取物复合制剂对乳房炎奶牛的影响及初步机理,为植物提取物在奶牛养殖业中的应用提供理论数据和技术支持。本研究通过饲养试验验证了中草药提取物复合制剂对奶牛生产性能的影响;对患有乳房炎奶牛免疫抗氧化水平及瘤胃细菌群落组成的影响;最后应用乳腺上皮细胞体外培养方法初步探究了中草药提取物复合制剂对LPS诱导炎症损伤的奶牛乳腺上
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在奶牛乳房炎的防治领域内,植物提取物是最具潜力的抗生素替代品之一。本文通过研究中草药提取物复合制剂对乳房炎奶牛的影响及初步机理,为植物提取物在奶牛养殖业中的应用提供理论数据和技术支持。本研究通过饲养试验验证了中草药提取物复合制剂对奶牛生产性能的影响;对患有乳房炎奶牛免疫抗氧化水平及瘤胃细菌群落组成的影响;最后应用乳腺上皮细胞体外培养方法初步探究了中草药提取物复合制剂对LPS诱导炎症损伤的奶牛乳腺上皮细胞的影响及其调控机制。相关研究结果如下:（1）试验1选取胎次、泌乳期（171d±45d）、产奶量相近,体细胞数高于50万个/m L（150.1±30.2万个/m L）的荷斯坦奶牛24头,随机分为两组,每组12头。研究中草药乙醇提取物复合制剂对患有乳房炎奶牛生产性能及血清免疫水平的影响。研究结果表明:日粮中添加由金银花、益母草、连翘和蒲公英的乙醇提取物混合制成的中草药提取物复合制剂,能够提升乳房炎奶牛的产奶量（P＜0.05）,改善乳品质（P＜0.05）,并降低乳中体细胞数（P＜0.05）;日粮中添加中草药醇提取物复合制剂对乳房炎奶牛血清免疫水平无显著性影响（P＞0.05）。（2）试验2.1选取胎次、泌乳期（128d±12d）、产奶量相近,体细胞数低于50万个/m L（8.56±1.03万个/m L）的荷斯坦奶牛24头,随机分为两组,每组12头。研究中草药水提取物复合制剂对健康奶牛生产性能的影响。研究结果表明:日粮中添加中草药水提取物复合制剂对奶牛产奶量、乳中体细胞数、营养物质表观消化率和血清生化指标没有影响（P＞0.05）,但能够提高乳中非脂乳固体含量（P＜0.05）。（3）试验2.2选取10头体况、泌乳期（216d±57d）、产奶量相近,且体细胞数（SCC）高于50万个/m L的经产荷斯坦纳奶牛,根据体细胞数相近原则,分为对照组（CON,n=5,SCC=97.48±23.75万个/m L）和处理组（TEST,n=5,SCC=98.78±29.92万个/m L）,两组奶牛均不进行药物治疗。研究中草药水提取物复合制剂对乳房炎患病奶牛生产性能、免疫抗氧化功能及瘤胃细菌区系的影响。研究结果表明:日粮中添加中草药水提取物复合制剂能够显著降低高体细胞奶牛乳中体细胞数（P＜0.05）,但对高体细胞奶牛生产性能没有显著性影响（P＞0.05）;日粮中添加中草药水提取物复合制剂能够显著提高乳房炎奶牛血清中Ig A、Ig M和IFN-γ的含量（P＜0.05）,显著降低血清中TNF-α的含量（P＜0.05）,而对乳房炎奶牛抗氧化能力无显著性影响（P＞0.05）;日粮中添加中草药水提取物复合制剂能够改变瘤胃内微生物群落的β多样性而不影响其α多样性。（4）试验3.1通过LPS诱导奶牛乳腺上皮细胞,并建立炎症损伤模型。研究结果表明:当LPS的最适添加剂量为10μg/ml,最佳刺激培养时间为6 h时可以成功建立乳腺上皮细胞的炎症损伤模型。通过对炎症损伤的奶牛乳腺上皮细胞进行转录组测序分析预测后发现,LPS主要通过刺激NOD样受体、TOLL样受体等激活NF-κB、MAPK、JAK-STAT和PI3K-Akt等信号转导通路,诱导大量趋化因子和炎症因子产生（P＜0.05）,进而引起了奶牛乳腺上皮细胞的炎症损伤。（5）试验3.2通过奶牛乳腺上皮细胞培养技术研究了中草药提取物复合制剂对LPS诱导炎症损伤的奶牛乳腺上皮细胞的影响,并通过转录组测序技术初步探究了中草药提取物复合制剂对乳腺上皮细胞炎症反应的调控机制。研究结果表明:两种中草药提取物复合制剂均能提高炎症模型奶牛乳腺上皮细胞的相对增殖率（P＜0.05）、降低细胞中炎症因子的含量（P＜0.05）,提升细胞的抗氧化能力（P＜0.05）。中草药醇提取物复合制剂能够抑制p38基因的表达（P＜0.05）,减轻LPS刺激下奶牛乳腺上皮细胞的炎症反应;中草药水提取物复合制剂能够同时抑制p38、MSK和CREB的表达（P＜0.05）,进而减轻LPS刺激下乳腺上皮细胞的炎症反应。
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