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胃癌是全球最常见的恶性肿瘤之一,近几年在我国胃癌发病率逐年增加,且预后差,复发率高。肿瘤的发生是一个多基因多步骤的过程,包括胃癌。肿瘤分子机制的研究,不仅可协助诊断、预判患者预后,还可以指导临床治疗,提供新的治疗方案。DEAD box RNA解旋酶作为RNA解旋酶家族成员之一,参与m RNA前体的加工、RNA结构的重塑、核糖体的合成、RNA的转运和降解。研究表明,许多DEAD box RNA解旋酶在肿瘤组织中表达异常,其表达水平与肿瘤的增殖、转移及预后息息相关,提示此类蛋白在肿瘤的发生发展中起着重要的作用。DDX41作为DEAD box RNA解旋酶成员之一,在血液系统恶性肿瘤中研究广泛,但在胃癌中的研究少之甚少。因此,研究DDX41在胃癌中的作用机制,对进一步了解胃癌的发生、发展意义重大。本文第一部分研究DDX41在胃癌组织中的表达水平及对胃癌细胞增殖能力的影响。第二部分研究胃癌细胞中DDX41与泛素连接酶DCAF1互相作用的分子机制。第一部分DDX41在胃癌组织中的表达水平及其与细胞增殖能力的关系目的:研究DDX41在胃癌组织中的表达水平及其临床意义,同时观察DDX41对胃癌细胞增殖能力的影响。方法:利用网站分析TCGA样本数据中DDX41在胃癌组织中的表达及其临床意义。细胞克隆形成实验检测细胞增殖能力,实时定量PCR技术检测si RNA敲除效率,划痕实验检测DCAF1对细胞迁移的影响。结果:与正常组织相比,DDX41在胃癌组织中表达增高,且不同分期胃癌组织样本中均表达增高。但是,DDX41在胃癌组织中的表达高低与胃癌患者预后不相干。在胃癌细胞MGC803中敲低DDX41可抑制细胞增殖,但过表达DDX41对细胞增殖能力无影响。在胃癌细胞gc-006-03中敲低DDX41对细胞增殖能力无影响。在胃癌细胞MGC803中敲低DCAF1可抑制细胞迁移、增殖及转移能力。结论:综上所述,本研究提示在胃癌组织中DDX41相比正常组织表达增高,同时在胃癌细胞MGC803中,DDX41参与细胞增殖过程,可能是潜在的靶向治疗的靶点。DCAF1参与胃癌细胞MGC803的迁移、增殖和转移,暗示DCAF1在胃癌发生发展中发挥重要作用。第二部分胃癌细胞中DDX41与泛素连接酶DCAF1互相作用的分子机制目的:研究DCAF1介导的RNA解旋酶DDX41泛素化修饰的分子机制。方法:网站预测RNA解旋酶DDX家族中与DCAF1存在潜在泛素化结合位点的蛋白。Western-blot实验检测目标蛋白在细胞中的表达情况。免疫共沉淀实验检测两种目标蛋白之间的相互作用。免疫共沉淀实验检测两种蛋白质相互作用对泛素化的影响。结果:DCAF1与RNA解旋酶DDX1相互结合,并影响DDX41的泛素化修饰。DCAF1介导的RNA解旋酶DDX41的泛素化修饰对DDX41的半衰期无影响。DCAF1通过DDX41中DEAD核心保守基序与DDX41相互结合。DCAF1通过DDX41中HELICc区介导RNA解旋酶DDX41的K63多聚泛素化修饰方式。结论:综上所述,DCAF1通过DDX41中DEAD核心保守基序与DDX41相互结合,并通过DDX41中HELICc区介导RNA解旋酶DDX41的K63多聚泛素化修饰方式,但这种多聚泛素化修饰对DDX41的半衰期无影响。