胎盘作为负责母胎间物质交换的重要器官,对于妊娠期胎儿的生长与发育过程至关重要。其功能障碍将导致胎儿宫内生长受限、子痫前期等疾病,甚至引起胎儿死亡。滋养细胞的内分泌功能是胎盘重要的功能之一,对胎儿的发育起到不可或缺的作用。但是,调控滋养细胞内分泌能力的研究机制,还不甚清楚。地西泮结合抑制因子(diazepam binding inhibitor,DBI)作为地西泮结合抑制因子,也被称为酰基辅酶A结合蛋白(Acyl-CoA-Binding Protein,ACBP),在类固醇生成细胞中高度富集和表达。大量研究表明,DBI可参与调控多种细胞类型的类固醇生成。但其是否参与调节胎盘滋养细胞起始合成类固醇激素并不清楚。本研究分析了自然流产患者的流行病学特征,并且利用人早孕绒毛组织和滋养细胞样的BeWo细胞系为模型,通过免疫组化、免疫荧光、RT-qPCR、蛋白质印迹法等试验,明确DBI在自然流产组以及正常对照组绒毛组织中的表达和定位。然后利用siRNA敲低滋养细胞中的表达后,检测激素合成酶的表达水平,并且检测DBI表达的变化对细胞增殖能力影响。获得以下研究结果:一、自然流产患者的流行病学特点比较将自然流产患者按年龄区分为高龄组,对两组患者的基本资料和孕产史进行分析,高龄组患者的初婚年龄大于适龄组,且怀孕次数、足月分娩次数和人工流产次数高于适龄组。二、DBI在自然流产和正常妊娠绒毛组织中的对比我们利用自然流产病例绒毛组织和对照组进行比较DBI的表达差异,Western印迹结果显示自然流产组DBI表达量低于对照组。三、滋养细胞中DBI的表达模式。利用人早孕绒毛组织和滋养细胞样的BeWo细胞系外诱导合体化模型,免疫组织化学和免疫荧光分析DBI在绒毛组织中的表达定位,RT-qPCR、蛋白质印迹法检测DBI在细胞模型中的表达。结果显示:DBI在早孕绒毛组织的细胞滋养细胞层、合体滋养细胞层和绒毛外滋养细胞中均有表达,并且Forskolin可诱导DBI的表达。四、DBI表达对激素合成的影响。利用细胞免疫荧光、RT-qPCR、蛋白质印迹法等技术,探究DBI的差异表达对BeWo细胞系类固醇激素合成的影响,结果显示:在诱导合体化组中,DBI、剪切酶的表达则呈增加的趋势,DBI的敲低减少了类固醇激素剪切酶的表达。为了探索DBI对类固醇激素分泌的影响,按以下分组处理BeWo细胞:对照siNC组、siDBI敲低DBI组、FSK诱导合体化组以及siDBI-FSK联合处理组。RT-qPCR结果显示DBI的敲低能显著减少类固醇限速酶的表达,Forskolin诱导DBI表达的BeWo中剪切酶的表达。五、DBI影响滋养细胞增殖能力已知在小鼠的子宫基质细胞中,雌激素和孕激素调节自噬,并且异常的孕激素信号传导导致子宫上皮持续增殖。通过EdU实验观察DBI对BeWo细胞增殖能力的影响,结果显示:在敲低组和FSK诱导组,阳性(绿色荧光)比例明显低于对照组。敲低DBI表达的BeWo细胞增殖能力降低。基于以上结果,我们认为,DBI在滋养细胞中广泛地表达,并且通过影响类固醇激素合成酶的表达影响滋养细胞起始合成类固醇激素,并且影响滋养细胞的增殖能力。DBI可能通过调控P450scc影响滋养细胞合成类固醇激素基因的表达。DBI低表达可能与自然流产的发生有关。