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目的:阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是发生于老年和老年前期、以进行性认知功能障碍和行为损害为特征的中枢神经系统退行性病变,是老年期最常见的痴呆类型。AD组织病理学上的典型改变为神经炎性斑、神经原纤维缠结、突触丢失和胶质增生。神经炎性斑的主要成分是β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ),Aβ可激活脑内的小胶质细胞分泌并释放各种免疫炎性介质,从而导致突触的结构和功能受损。目前这一作用的具体机制尚不明确。研究发现,Aβ诱导的神经炎症可通过影响neuroligin-1(NLGN1)的表观遗传修饰,从而减少NLGN1的表达,并最终损伤突触的结构和功能。NLGN1是位于兴奋性突触后膜上的一种神经粘附分子,在突触的形成、发育、成熟和突触可塑性调控中发挥至关重要的作用,NLGN1功能的改变所导致的突触结构和功能障碍与AD发病密切相关。表观遗传是指在核苷酸序列不发生改变的情况下,基因表达发生可遗传的变化。其主要的调节机制有DNA甲基化、组蛋白修饰、染色质重塑及非编码RNA等。雷公藤内酯醇(triptolide,T10)是从卫矛科植物雷公藤中分离出的环氧化二萜内酯化合物,具有显著的抗炎和免疫抑制作用,并且具有表观遗传修饰作用。雷公藤氯内酯醇(tripchlorolide,T4)是从雷公藤中分离到的一种T10的衍生物,T4具有比T10更强的抗炎、免疫抑制作用,但其毒性低于T10。已有的研究提示T10和T4能抑制AD模型动物脑内的免疫炎症反应,改善AD模型动物的学习记忆能力,并具有明确的突触保护作用。但T10和T4究竟通过何种机制发挥其突触保护作用还不清楚。本研究从T10和T4对AD模型中NLGN1表观遗传调节的角度探究T10和T4对AD的突触保护作用。方法:1.本研究使用APP/PS1双转基因AD模型小鼠作为AD动物模型,APP/PS1双转基因AD模型小鼠随机分成三组:AD模型组、T10治疗组、T4治疗组,每组20只。20只同种野生型雌性小鼠设为对照组。2.T10治疗组每日腹腔注射T10 0.1mg/kg(T10溶解于1%DMSO的生理盐水中),T4治疗组每日腹腔注射T4 25μg/kg(T4溶解于1%DMSO的生理盐水)。共给药60天。3.使用免疫荧光染色、western blot、实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)等方法检测各组实验动物海马神经元NLGN1的表达量,观察T10及其衍生物T4对AD动物模型海马神经元NLGN1表达的影响。4.使用western blot、实时荧光定量PCR等方法检测各组实验动物海马组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylases 2,HDAC2)和甲基化CpG结合蛋白2(methyl-CpG-binding protein 2,MeCP2)的表达量,观察T10及其衍生物T4对各组小鼠海马HDAC2以及MeCP2表达的影响。5.使用免疫共沉淀技术检测各组实验动物海马HDAC2和MeCP2的相互作用,观察T10及其衍生物T4对各组小鼠海马HDAC2和MeCP2的相互作用的影响。6.使用染色质免疫共沉淀技术检测各组实验动物海马NLGN1启动子区MeCP2、HDAC2和组蛋白H3乙酰化的表达,观察T10及其衍生物T4对各组小鼠海马NLGN1启动子区MeCP2、HDAC2和组蛋白H3乙酰化表达的影响。7.使用DNA甲基化免疫共沉淀技术检测各组实验动物海马NLGN1启动子区胞嘧啶甲基化的表达,观察T10及其衍生物T4对各组小鼠海马NLGN1启动子区胞嘧啶甲基化的影响。结果:1.与对照组小鼠相比AD模型小鼠海马NLGN1的蛋白表达量明显下降,而T10和T4上调AD模型小鼠NLGN1的表达。2.与对照组小鼠相比AD模型小鼠海马HDAC2的蛋白表达量明显升高,而T10和T4抑制APP/PS1双转基因AD模型小鼠HDAC2的表达。3.与对照组小鼠相比AD模型小鼠海马MeCP2的蛋白表达量明显升高,而T10和T4抑制APP/PS1双转基因AD模型小鼠MeCP2的表达。4.与对照组小鼠相比AD模型小鼠海马HDAC2-MeCP2复合物的形成明显升高,而T10和T4抑制APP/PS1双转基因AD模型小鼠HDAC2-MeCP2复合物的形成。5.与对照组小鼠相比AD模型小鼠海马NLGN1启动子区域MeCP2和HDAC2的表达明显升高,而T10和T4抑制APP/PS1双转基因AD模型小鼠NLGN1启动子区域MeCP2和HDAC2的表达。6.与对照组小鼠相比AD模型小鼠海马NLGN1启动子区域组蛋白H3乙酰化明显降低,而T10和T4增强APP/PS1双转基因AD模型小鼠NLGN1启动子区域组蛋白H3乙酰化表达。7.与对照组小鼠相比AD模型小鼠海马NLGN1启动子区域胞嘧啶甲基化明显升高,而T10和T4降低APP/PS1双转基因AD模型小鼠NLGN1启动子区域胞嘧啶甲基化表达。结论:1.T10和T4具有增加AD模型小鼠海马神经元NLGN1表达量的作用。2.T10和T4具有抑制AD模型小鼠海马神经元HDAC2和MeCP2表达量的作用。3.T10和T4具有抑制AD模型小鼠海马神经元MeCP2与HDAC2结合的作用。4.T10和T4具有抑制AD模型小鼠海马神经元NLGN1启动子区域MeCP2和HDAC2表达的作用。5.T10和T4具有增加AD模型小鼠海马神经元NLGN1启动子区域组蛋白H3乙酰化表达的作用。6.T10和T4具有抑制AD模型小鼠海马神经元NLGN1启动子区域胞嘧啶甲基化的作用。