岩原鲤Procypris rabaudi(Tchang)属鲤形目,鲤科,鲤亚科,原鲤属。只分布于长江上游及其支流,是长江上游的一种上等经济鱼类,以肉质细嫩,味道鲜美而闻名于世。近年来由于其资源遭到严重破坏,而本种鱼类生长速度较为缓慢,群体得不到及时补充,故野生群体正趋于逐年减少。在《中国濒危动物红皮书》中已被列为易危物种,重庆市也已将其列为保护鱼类。近年来,岩原鲤的人工养殖取得长足发展,但是,无论是在自然条件下还是在人工环境中,岩原鲤的生长速度缓慢,生活周期较长,导致养殖成本增高,风险增大,从而大大的制约了其商品化的进程。生长激素(growth hormone,GH)是由脑垂体间叶细胞分泌的一种多肽激素,具有调节生长发育,参与体内代谢调节,增进食欲,提高食物转化率等作用。本研究首次从岩原鲤脑垂体扩增出生长激素部分cDNA序列,并采用RT-PCR的方法分析其组织表达特性和雌二醇对其mRNA表达的影响,主要研究如下:1.岩原鲤生长激素部分cDNA序列克隆及同源性分析在对多种硬骨鱼类的生长激素基因进行了多重比对后设计了2对特异性片段引物,以来自岩原鲤脑垂体的mRNA反转录得到的cDNA为模板扩增得到了岩原鲤生长激素的部分片段序列。运用DNAMAN软件对岩原鲤与其他25个物种的生长激素cDNA相应部分的同源性进行多重比对,结果发现:岩原鲤与其他25个物种生长激素cDNA相应部分的相似性为81.41%。岩原鲤生长激素cDNA部分序列与其他鱼类具有很高的同源性,相似性最高高达95.77%,而与两栖纲的非洲爪蟾(Xenopus laevis)为47.32%,鸟纲的鸡(Gallus domestiaus)、鸭(Anasplatyrhynchos)分别为50.79%、49.53%,哺乳纲的人(Homo sapiens)、鼠(Mus musculus)、牛(Bos taurus)、家猫(Felis catus)分别为48.13%、52.37%、53.63%、51.42%。2.岩原鲤生长激素部分cDNA序列推导的氨基酸序列同源性分析运用DNAMAN软件对岩原鲤与其他25个物种的生长激素cDNA部分序列推导的氨基酸序列的同源性进行多重比对,比对结果发现:26个物种生长激素氨基酸的相似性为76.75%。岩原鲤生长激素氨基酸部分序列与鱼类具有很高的同源性,相似性高达94.23%,而与两栖纲的非洲爪蟾(Xenopus laevis)为33.33%,鸟纲的鸡(Gallus domestiaus)、鸭(Anas platyrhynchos)分别为35.24%、35.24%,哺乳纲的人(Homo sapiens)、鼠(Mus musculus)、牛(Bos taurus)、家猫(Felis catus)分别为32.08%、36.19%、39.05%、37.14%,而相应片段哺乳纲的相似性高达88.46%。3.生长激素的组织特异性表达研究根据得到的部分cDNA序列,设计了一对用于表达研究的特异性引物。此外,根据斑马鱼的β-actin序列设计了一对内参引物。PCR结果显示:生长激素基因在垂体、肌肉、鳃、肾、眼组织都有表达。其中生长激素基因在垂体的相对表达量最高,在肌肉、鳃、肾、眼中表达较低,而在肝脏中没有检测到表达。4.雌二醇对生长激素mRNA表达的影响研究设计了每千克鱼体1mg、5mg、10mg浓度的雌二醇组和一个生理盐水组,分别在腹腔注射48h、72h、96h后取样,采用RT-PCR的方法对生长激素mRNA表达量进行半定量分析。结果显示:雌二醇对生长激素mRNA的表达没有影响。