AtLEAFY诱导表达对菊花花期调控的研究

来源 :山西大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:toughlee
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菊花(Dendranthema morifolium)为菊科多年生草本植物,是我国十大传统名花之一,同时也是太原、开封、芜湖等城市的市花。根据菊花花期的早晚可以将其划分为夏菊和秋冬菊。夏菊的花期一般在夏季,但其品种较为单一,且花型较小,观赏性较差,多被应用于街道美化。更多的菊花属于严格的短日照植物,在晚秋或者冬季开花。这样使得观赏性较强的菊花花期受到了季节的限制,导致其商品性降低。常规控制花期调控的方法已有较多研究,如对园艺栽培技术、光照时间以及温度的调控。但是这些方法大多数操作繁琐,条件不易控制,提高了花卉的成本。本研究主要目标是:利用农杆菌介导的叶盘转化法,以大菊品种黄金虎(Dendranthema morifolium (Ramat) Kitamura)的野生型及实验室已有的转基因菊花植株Y4(由rd29A::SOC1植物表达载体转化野生型黄金虎获得)为植物材料,分别导入由rd29A启动子调控表达的具有控制植物开花时间功能的LEAFY基因,旨在获得通过简单易控的方法调控花期的菊花新种质。主要实验结果如下:1.植物表达载体的构建:从拟南芥]mRNA扩增获得的花分生组织特征基因LEAFY。使用改造的pCambia2300表达载体(已含有胁迫诱导启动子rd29A),使用酶切、连接等方法将LEAFY基因连接到rd29A启动子的下游。使用酶切和PCR检测技术,鉴定重组质粒,并转化土壤农杆菌LBA4404。2.转基因植株的获得:使用叶盘法转化菊花品种黄金虎野生型和Y4株系,分别获得54和49个抗性芽,在无选择压的培养基中培养获得相同数目的再生苗;对再生苗进行生根抗性筛选,分别获得23和45个生根抗性苗;采用PCR技术检测生根抗性苗,最终获得3和4个阳性苗,分别命名为L1、L2和L3(以野生型为遗传背景)以及SL1、SL2、SL3和SL4(以Y4为遗传背景)。转化率为2.02%和3.73%。3.NaCl胁迫诱导实验:分别选用四种不同浓度(50、100、150和200mmol/L)的NaCl溶液胁迫诱导处理L1和SL2转基因株系6h。实验结果表明:L1和SL2分别在150mmol/L和100mmol/L的NaCl溶液处理下,LEAFY基因的表达水平达到最高值。且这两个浓度对于菊花的正常生长没有明显的影响,因此确定这两个浓度为最适胁迫诱导浓度。
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