背景:近年来随着结肠癌诊疗技术不断进步,结肠癌患者的总体生存率得到了明显的升高,但是术后易复发和转移,整体治疗效果不是很理想,针对结肠癌细胞特异性改变、寻找特异性靶点愈来愈成为结肠癌治疗发展的主要方向。 目的:研究白血病抑制因子（Leukemia inhibitory factor,LIF）调控结肠癌细胞CD44表达的分子机制,评估LIF调节机制对结肠癌细胞增殖性、耐药性及成瘤能力的影响,探讨LIF干预对结肠癌疾病治疗的意义。 方法:1.通过生物信息数据分析LIF与结肠癌的关系。2.通过MTT、平板克隆试验和细胞成球实验检测加入外源性LIF后,结肠癌细胞增殖能力、成球能力及抗LIF抗体阻断LIF对结肠癌细胞的增殖效应。3.采用划痕实验观察LIF对结肠癌细胞迁移能力的影响。4.通过RT-PCR方法检测添加外源性LIF后结肠癌细胞中多种干细胞标志物m RNA的表达情况。5.通过Western Blot方法检测添加外源性LIF后结肠癌细胞下游信号通路激活情况,干细胞标志物CD44、Nanog、OCT-4A蛋白的表达情况及抗LIF的抗体阻断LIF对结肠癌细胞信号通路STAT3的活化、对干细胞标志物OCT-4A的活化情况。6.采用SPSS 22.0对数据进行统计学分析,采用t-检验和方差分析,判断是否有显著性差异。 结果:生物信息数据分析显示LIF与结肠癌显著相关,LIF在结肠癌组织中表达量显著高于癌旁正常组织,并且LIF m RNA表达水平升高可显著降低患者的无病生存期。在研究LIF对结肠癌细胞系表型特征的影响中,实验结果表明LIF可以促进结肠癌细胞的增殖、迁移、克隆形成及肿瘤球形成能力;进一步筛选与结肠癌干性相关的标志物,结果证明CD44在添加LIF后显著增加,生物信息数据分析结果显示,在结肠癌组织中CD44表达量显著高于癌旁正常组织,结合LIF的分析数据,将两者进行相关性分析后发现CD44的表达升高与LIF的表达升高显著相关;这些实验结果均表明LIF可促进结肠癌细胞干性的形成,并与干细胞标志物CD44显著相关。我们进一步用RT-PCR,Western Blot和FACS证明,外源性添加LIF后CD44的表达增加,并呈现时间剂量的依赖关系。在研究LIF对结肠癌细胞系分子机制的影响中,实验结果证明LIF可激活JAK/STAT3信号通路,并可活化干细胞标志物OCT-4A、Nanog和SOX2。为研究体外阻断LIF活性对结肠癌治疗的意义,我们制备了可阻断LIF活性的中和抗体即抗LIF抗体,实验结果表明抗LIF抗体能够抑制LIF对结肠癌细胞的增殖活性,并能阻断LIF对STAT3信号的激活,同时能阻断LIF对干细胞标志物OCT-4A的活化。 结论:1.LIF可促进结肠癌细胞的增殖和迁移。2.LIF可促进结肠癌干细胞CD44、OCT-4A、Nanog的表达。3.抗LIF抗体可阻断LIF对结肠癌细胞发挥的作用。