靶向VEGF的shRNA纳米传输系统在小鼠肝癌模型中的应用

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肝癌是一种恶性程度高、浸润和转移性强,并且先天性耐药的癌症。在我国它的病死率位居恶性肿瘤的第二位,因此迫切需要研究和发展新的治疗方法。由于RNAi可以选择性、高效率地干扰特定基因的表达,因此RNAi为肝癌的基因治疗研究开辟了一条新的途径。   肝癌是一种多血管实体瘤,血管内皮生长因子VEGF在肝癌的生长和转移过程中发挥了非常重要的作用,我们拟通过靶向VEGF的shRNA(发夹双链RNA)进行小鼠肝癌疾病模型的治疗研究。由于shRNA/siRNA在体内稳定性差,缺乏特异性靶向组织器官的能力,因此生物相容性好、能在体内缓慢降解并且具有肝脏靶向能力的载体是成功实施肝癌RNAi治疗的关键。   本实验首先合成了具有肝细胞靶向性的半乳糖修饰的低分子量壳聚糖(gal-LMWC),并对gal-LMWC作为shRNA载体的可行性进行了研究,结果表明gal-LMWC几乎没有细胞毒性,是一种安全的shRNA输送载体,能将shRNA有效地转入小鼠肝癌细胞H22和HepS中。然后,我们通过gal-LMWC载体对三条靶向小鼠VEGF的shRNA进行了细胞转染,通过real-time PCR和ELISA实验研究三条shRNA对VEGF的抑制效果,实验结果表明不管是基因层面还是蛋白角度都是shRNA2的抑制效果最好。最后,我们在构建的小鼠异位肝肿瘤模型和原位肝肿瘤模型中,采用原位瘤体注射和尾静脉注射的方式,通过ELISA、组织切片和免疫组化等实验方法,研究并证实了Gal-LMWC/shRNA2对VEGF的抑制作用,对肿瘤新生血管的抑制作用以及对肿瘤生长的明显抑制效果。   综上,本实验在小鼠肝癌细胞和小鼠肝肿瘤模型中,证明了半乳糖修饰的低分子量壳聚糖(gal-LMWC)能够保护并运输靶向VEGF的shRNA到肝脏肿瘤组织,并且能够有效抑制H22肝肿瘤中血管新生,从而抑制肿瘤的生长。
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