论文部分内容阅读
本论文主要研究了大鼠骨髓间充质干细胞BMSC来源的Exosome对受到H2O2损伤后的HT22细胞的保护作用。在实验中通常会用SD大鼠的骨髓来分离原代骨髓间充质MSC细胞。等到细胞传代三次以后观察其形态,并用无血清的培养基对BMSC细胞饥饿处理24h后收集BMSC的上清,用密度梯度离心法收集来源于大鼠骨髓间充质干细胞BMSC的外泌体。首先使用TEM从大小上初步鉴定外泌体。然后提取外泌体的总蛋白并用BCA法测其浓度,再使用免疫印迹法鉴定外泌体特异性抗原分子,并用HT22细胞建立过氧化氢损伤模型,先后分为空白组(正常生长的HT22细胞),对照组(经过0.8mM的H2O2处理2h),Exosome+H2O2组(分别在不同时间加入Exosome和H2O2)。采用荧光染色方式观察细胞形态的变化,采用MTT法及SOD、LDH检测方法检测不同处理方式对HT22细胞的毒性作用。培养一段时间后,生长状态良好BMSC细胞呈长梭形贴壁,无序及涡旋状生长。培养基经过离心后可以得到呈圆形且有完整胞膜的囊泡。此泡状物表达外泌体特异性膜CD9、CD81及HSP70抗原。经H2O2损伤后的HT22细胞骨架发生变化,经由MSC分泌的Exosome处理后的HT22细胞的细胞骨架有所恢复,所以大鼠骨髓间充质干细胞Exosome可明显改善受到氧化损伤后的HT22细胞的形态学损伤。MTT法结果显示,损伤组HT22细胞的增殖抑制率有所上升,通过大鼠骨髓间充质干细胞Exosome的作用发现细胞的增殖抑制率降低,与H2O2对照组比较差异明显。同时HT22细胞经H2O2损伤后LDH释放量以及SOD活性升高,但在加入Exosome后可以显著降低LDH释放量及SOD活性。利用PKH26对外泌体的染色,进而追踪其在HT22细胞内的定位,发现Exosome被细胞摄取后在靠近细胞和周围聚集。研究表明来源于大鼠骨髓间充质干细胞的外泌体对H2O2损伤后的HT22细胞的损伤具有良好的保护作用,其作用机制可能与提高HT22细胞的抗氧化能力有关。