【摘 要】
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微生物群落在生活垃圾降解过程中起着重要作用,生活垃圾中微生物群落变化的研究一直是人们关注的热点。随着分子生态学技术的发展,揭示生活垃圾中微生物群落构成成为可能。目
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微生物群落在生活垃圾降解过程中起着重要作用,生活垃圾中微生物群落变化的研究一直是人们关注的热点。随着分子生态学技术的发展,揭示生活垃圾中微生物群落构成成为可能。目的:建立固体垃圾及其渗滤液中微生物总DNA的提取方法,采用基于rDNA同源性分析的分子生态学方法研究垃圾填埋过程中微生物群落在不同时空及环境条件下的演替过程。内容及方法:(1)通过核酸总量、纯度、片段分布情况、PCR扩增指标来评价不同的提取方法对从垃圾和渗滤液样品中提取总DNA的效果,得到较适合垃圾和渗滤液总DNA的提取方法。(2)采用传统微生物学方法、核糖体DNA限制性酶切分析(amplified ribosomal DNA restriction analysis,ARDRA)和核糖体基因间区序列分析(ribosomal intergenic spacer analysis,RISA)分析评价固体垃圾及其渗滤液的微生物多样性。(3)采用RISA分析方法研究厌氧-好氧生物反应器填埋场微生物生态。结果:(1)从垃圾和渗滤液中均提取得到高质量的总DNA,DNA分子片段在23kb左右,A260/A280大于1.9,A260/A230大于2.0,不需经过纯化直接用于PCR扩增;(2)传统微生物方法、ARDRA和RISA分析均显示出固体垃圾比渗滤液具有更为丰富的微生物多样性,也显示了传统方法的局限性;(3)厌氧-好氧反应过程经PCR扩增ITS片段得到RISA图谱,厌氧阶段有4个优势类群,一些兼性菌类群在厌氧-好氧阶段均起到重要的作用。结论:获得较适合垃圾和渗滤液总DNA提取的新方法,新方法增加了样品的预处理,减少了通常环境样品DNA提取过程中的纯化步骤,强调二次抽提,减少了DNA的损失,为环境样品的总DNA提取提供了参考;固体垃圾比渗滤液具有更为丰富的微生物多样性;厌氧-好氧生物反应器填埋场厌氧阶段有4个优势类群,一些兼性菌类群在厌氧-好氧阶段均起到重要的作用。
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