泛素(Ubiquitin，Ub)是一个由76个氨基酸组成的高度保守的多肽链。它在细胞中以非共价键方式或通过共价键与蛋白质牢固结合。主要功能是参与蛋白质降解，通过介导蛋白降解、改变蛋白的细胞定位、改变蛋白的酶活性、改变蛋白与蛋白的相互作用等方式影响其所结合蛋白的功能与活性。而蛋白质降解异常又与许多疾病的发生密切相关。随着医学分子生物学技术的进步，人们已经从分子机制上认识和讨论它们之间的关系。近年来泛素及其类似物已经成为了分子生物学的研究热点之一。 本试验根据GenBank中已发表的人泛素基因mRNA序列，借助Primer5.0设计了六对寡核苷酸引物，运用引物搭桥法合成目的序列Ub。在克隆出人泛素基因(Ub)的基础上，构建原核表达载体pGEX-4T-Ub并对Ub基因进行了原核表达和纯化，为进一步研究其功能奠定了基础。研究结果如下： 1．根据GenBank(登陆号：M17524)中公布的人泛素基因(Ub)序列设计特异性引物，用引物搭桥法进行PCR扩增，获得228bp的DNA片段。 2．利用定向克隆的方法，以pGEX-4T-1为载体，利用BamH Ⅰ和Sal Ⅰ酶切位点，将纯化的基因Ub克隆至pGEX-4T-1中，构建了原核表达载体pGEX-4T-Ub。经酶切鉴定筛选出阳性克隆，进一步的序列分析确认了其中Ub序列的正确性。 3．将原核表达质粒pGEX-4T-Ub，转化至E．coli BL21(DE3)pLysS感受态细胞中，经IPTG诱导后SDS-PAGE分析，在约35 kD处出现了与预期目的蛋白相一致的外源蛋白带。 4．Western blot分析重组蛋白，在目的蛋白相应位置出现了特异性的染色条带，这表明所表达的重组蛋白是人泛素蛋白。