研究背景原发性肝癌是世界范围内常见恶性肿瘤之一,据世界卫生组织年度健康报告,全球每年有62万人死于肝癌。原发性肝癌病理类型包括肝细胞癌、胆管细胞癌、混合型癌三种。三种组织类型中以肝细胞癌最多见。据统计在我国肝细胞癌型约占肝癌病例总数的90%,且此型多合并肝硬化。目前肝癌的治疗手段多种多样,包括手术切除、介入化疗栓塞、射频消融、微波消融、高强度聚焦超声消融、氩氦刀、化疗、粒子植入、生物免疫治疗、肝移植等方法。治疗效果较以往也已经有了显著提高,但远期疗效仍不理想。据日本统计,肝癌手术切除病人的五年生存率只有40.8%,而TACE后则为8.0%。国内研究资料显示,肝切除患者5年生存率为30%到60%,其中小肝癌为50%到60%,大肝癌为20%到30%。手术以外的姑息性治疗,如冷冻治疗为10%到20%,TACE约为7%到10%,而全身化疗效果非常差。单个癌灶<4厘米的肝癌肝移植病人,术后5年生存率为57%,而>8厘米的仅为11%。而采取综合治疗手段的肝癌病人的预后有所改善,比如手术切除后进行多次TACE。不论是哪种治疗手段,远期疗效都不理想。造成肝癌远期疗效不理想的主要原因还是肝癌转移或复发。国内有人随访统计发现,肝癌手术切除病人术后1、2、3年肝癌复发率分别达到了14.3%,35.7%,42.9%。目前对于恶性肿瘤转移复发的机制尚不太清楚,很多问题没有解决。为了进一步改善肝癌的治疗效果,有必要更深入地研究了解癌细胞的发生及扩散行为。很多学者以蛋白质分子、基因为研究对象,从细胞水平和分子生物学水平对癌细胞的生物学微观行为进行了大量的研究,结果发现肿瘤细胞的发生、扩散和细胞表面异常表达的一些蛋白质分子具有关联性。其中一种叫做紧密连接蛋白的蛋白质正在逐渐引起研究人员的注意。紧密连接蛋白(claudin, CLDN)是一个蛋白质家族,1998年Furuse etal首先发现并命名第一种紧密连接蛋白,目前已经发现20余种。它们在结构上属于跨细胞膜蛋白,参与组成正常组织细胞之间的紧密连接结构,在不同组织细胞中有不同的表达。根据国内外的研究成果,CLDN的异常表达和多种恶性肿瘤细胞的发生及扩散相关。比如,CLDN1在乳腺癌细胞中低表达,在子宫内膜癌细胞中低表达,而在大肠癌细胞中表达增高,在甲状腺癌细胞中表达增高。CLDN的异常表达和恶性肿瘤细胞的侵袭性有关。比如,有人研究了胃癌组织中CLDN1蛋白阳性率与肿瘤大小、浸润深度、TNM分期、脉管侵犯、淋巴结转移、远处转移呈负相关。CLDN的异常表达和恶性肿瘤细胞的侵袭性相关,其机制在于CLDN的异常表达使细胞间紧密连接结构受到破坏、细胞间连接变得松散,从而增加了癌细胞的侵袭性。CLDN家族在肝细胞癌中的表达情况目前鲜见报道。本实验以细胞表面紧密连接蛋白CLDN1和CLDN4为研究对象,通过研究CLDN在肝细胞癌组织中和正常肝组织中的表达情况并分析和临床病理因素的关系,来探讨CLDN和肝细胞癌发生及扩散的关系。目的检测紧密连接蛋白CLDN1和CLDN4在人肝细胞性肝癌(HCC)组织与正常肝脏组织中的表达,分析CLDN1和CLDN4在人肝细胞性肝癌(HCC)组织与正常肝脏组织中的表达是否具有差异性以及和临床病理因素的关系,探讨肝细胞肝癌的浸润蔓延和细胞间紧密连接蛋白的关系。材料与方法本研究收集郑州大学第一附属医院肝胆胰外科近两年外科手术切除的60例肝细胞肝癌及50例正常肝组织石蜡标本,采用免疫组织化学染色法分别检测肝癌标本中和正常肝组织标本中紧密连接蛋白CLDN1和CLDN4的表达情况。收集60例肝细胞肝癌患者的临床相关信息,采用SPSS18.0统计软件包对实验数据进行统计处理,并进行各种统计学分析,探讨CLDN1和CLDN4的表达与HCC的关系及其临床意义。结果正常肝组织中CLDN1表达阴性(0/60), CLDN4表达阳性(60/60)。阴性表现为主要位于细胞膜的浅黄色染色,阳性表现为主要位于细胞膜的棕黄染色,细胞质中也可看到棕黄染色。HCC组织中CLDN1阳性表达率70%(42/60),明显高于正常肝组织(P<0.05), CLDN4阳性表达率25%(15/60),明显低于正常肝组织(P<0.05). CLDN1和CLDN4在HCC组织的表达与患者年龄、性别、血液AFP浓度均无关(P>0.05),与肿瘤大小、数目、分化程度亦无关(P>0.05). CLDN4的表达和肿瘤的大体病理类型有关联,和有无门静脉癌栓有关联。HCC组织中CLDN1和CLDN4的表达具有关联性,关联系数r=0.533.结论1. CLDN1在肝细胞癌组织中异常高表达,CLDN4在肝细胞肝癌组织中异常低表达。CLDN1和CLDN4在肝细胞癌组织中表达具有相关性。CLDN1可能是肝细胞癌的一种原癌基因；CLDN4可能是肝细胞癌的一种抑癌基因。2. CLDN1和CLDN4的异常表达与肿瘤大小、病理分化程度、数目、血清AFP值、患者性别、年龄均无关。CLDN4的异常表达和肿瘤的大体病理类型以及有无门静脉癌栓有关联。3. CLDN1和CLDN4在肝细胞癌组织中异常表达可能导致癌细胞间连接变得松散,从而增加了癌细胞的侵袭性,促进癌细胞浸润蔓延及转移。