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[目的]既往大量研究表明,在糖尿病视网膜病变(DR)、高度近视等眼部疾病患者的血清或玻璃体中转甲状腺素蛋白浓度存在异常表达。视网膜微血管内皮细胞(RVECs)和视网膜色素上皮细胞(RPECs)是诸多眼科疾病基础研究的重要媒介。本次研究首先利用组织半悬浮培养法改良传统分离培养大鼠RVECs的方法。其次通过观察转甲状腺素蛋白(TTR)对RMVECs及RPECs增殖、迁移等的影响来考察其与新生血管相关因子(VEGF mRNA)表达的关系,并通过体外实验探究TTR是否对人RMVECs和人RPECs生物学行为方面起作用。本研究试图从以上三方面阐述TTR与DR的相关性,为进一步研究其机制提供依据。[方法]①分离大鼠视网膜并剪碎,将4～5个碎块半悬浮培养,使用混有10%胎牛血清并滴加重组牛碱性成纤维细胞生长因子滴眼液的DMEM/F12培养基,所获得的细胞用Ⅷ因子相关抗体鉴定,并使用传统冻存及复苏的方法保存。②培养的人RMVECs依照TTR浓度不同分为0μmol/L组和4μmol/L组,噻唑蓝(MTT)胞迁移实验、细胞划痕实验分别检测不同浓度TTR对人RMVECs增殖、迁移和损伤愈合的影响。③通过加入外源性TTR考察TTR对人RPECs增殖的影响。另外,利用小干扰RNA(siRNA)沉默人视网膜色素上皮自身表达的TTR,使用Western blot检测沉默效果;RT-PCR法考察沉默后VEGF mRNA的变化;通过transwell共培养体系,观察TTR沉默前后人RMVECs增殖、迁移行为的改变。[结果]①24h组织块生长固定在培养皿中,6d可见细胞从组织块边缘游出并可见多个细胞集落,16d基本铺满培养皿。Ⅷ因子相关抗体染色阳性。细胞可持续生长并传代。② MMT比色法检测结果显示,48h后,两组吸光度值4μmol/L组(0.40±0.03)较 0μmol/L 组(0.17±0.02)高,差异有统计学意义(t=15.47,P=0.0001)。细胞迁移实验结果显示,48h两组人RMVECs向小室背面迁移数4μmol/L组[(227±14)个]较0μmol/L组[(140±7)个]多,差异有统计学意义(t=5.44,P=0.006)。细胞划痕实验显示,24h划痕愈合距离,4μmol/L组[(330.0±23.1)μm]较 0μmol/L 组[(134.4±45.4)μm]远,差异有统计学意义(t=8.25,P=0.0012)。③MTT 比色法显示,4μmol/L 组 A 值(0.36±0.01)低于 0μmol/L 组A 值(0.72±0.02),差异有统计学意义(t=18.08,P<0.0001),TTR对人RPECs的增殖有抑制作用;Western blot法检测TTR的表达抑制,实验组与对照组间差异有统计学意义(P>0.05),TTR的表达被有效沉默;沉默TTR表达后检测VEGF mRNA表达,空白对照组、阴性对照组、实验组三组间两两比较,差异均无统计学意义(P>0.05),TTR的沉默表达并未在mRNA水平上引起VEGF的表达改变;48h人RPECs-人RMVECs共培养细胞增殖实验结果显示,人RMVECs增殖数NCsiRNA 组[362.8±17.7)个]和 TTRsiRNA 组[(252.4±13.92)个]间差异有统计学意义(t=4.901,P=0.0012),沉默TTR表达会抑制人RMVECs的增殖能力。48h人RPECs-人RMVECs共培养细胞迁移实验结果显示,人RMVECs向外迁移数 NCsiRNA 组[(229.0±14.9)个]和 TTRsiRNA 组[(147.8±12.2)个]比较,差异有统计学意义(t--4.213,P=0.0029)。沉默TTR表达会抑制人RMVECs的迁移能力。[结论]①用组织块半悬浮培养法,可以简便的获得RMVECs,所获细胞性状稳定,可用于进一步实验研究。②TTR对人RMVECs增殖、迁移和损伤愈合有明显的促进作用。③TTR能抑制人RPECs增殖。siRNA可沉默人RPECs表达TTR,沉默后可抑制人RMVECs增殖和迁移,次现象并非通过VEGF实现。